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夏末至,转身

新虫 (小有名气)

[求助] PCR回收已有4人参与

定点突变PCR扩增后切胶回收为什么回收不出来,刚开始以为是试剂盒的事,今天换了试剂盒结果回收后跑胶还是没有,这是为什么?

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1272356152

新虫 (正式写手)

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2楼2018-03-16 20:55:34
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

PCR产物条带不够亮,浓度太低了吧?如果是这样,就多扩增几管一起做胶回收。

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3楼2018-03-17 04:55:41
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
回收没有,你确定PCR的时候有条带?有几种可能性,你可以重新PCR如果有带多做一些,然后一起回收,这是考虑回收浓度的问题,还有就是可能PCR就没有带,可以考虑重新设计引物

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生活活生生累死
4楼2018-03-17 09:02:02
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夏末至,转身

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by bio转录组 at 2018-03-17 09:02:02
回收没有,你确定PCR的时候有条带?有几种可能性,你可以重新PCR如果有带多做一些,然后一起回收,这是考虑回收浓度的问题,还有就是可能PCR就没有带,可以考虑重新设计引物

pcr后跑了胶,确定有条带,我也让其他人看了,我们猜测可能真的是浓度太低的问题

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5楼2018-03-17 22:41:54
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夏末至,转身

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2018-03-17 04:55:41
PCR产物条带不够亮,浓度太低了吧?如果是这样,就多扩增几管一起做胶回收。

嗯嗯,有可能是浓度低的问题,下次一起回收

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6楼2018-03-17 22:43:09
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夏末至,转身

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 1272356152 at 2018-03-16 20:55:34
不用回收

不用回收?那怎么往下做嘞,回收了以后我还要连接导入大肠杆菌呢,必须回收嘞

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7楼2018-03-17 22:44:29
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1272356152

新虫 (正式写手)

私信我,我告诉你怎么做

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8楼2018-03-18 00:47:25
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ghst110

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不用回收,DPn I可直接消化,消化完转化就可,感受态效率高,仅可见的条带就能长出足够的菌落。做突变不必像TA克隆那样长非常多菌落
*才随遇长,识以穷精*
9楼2018-03-27 11:30:23
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阿里郎爱阿里

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

浓度太低啦,拿你的第一次PCR产物作模板再跑一锅就好啦,或者其他能增加产物浓度的方法都可以。祝实验顺利~
10楼2018-03-27 14:33:22
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