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木星海

金虫 (正式写手)

[求助] Gateway克隆表达系统的问题

Gateway克隆表达系统用到的两种反应BP反应和LR反应,为什么只能进行LR反应后将目的基因重组整合到表达载体上进行蛋白的翻译表达?是否可以在PCR的过程中将attB序列加到目的基因上以后,再通过BP反应将目的基因重组到带有attP序列的表达载体上直接进行翻译表达?


也就是把 step1. attB-目的基因-attB + 带attP序列和ccdB的入门载体(——BP重组反应——>)带attL和目的基因的入门载体+attR-ccdB-attR
              step2: 带attL和目的基因的入门载体+带attR序列和ccdB的表达载体(——LR重组反应——>)带attB和目的基因的表达载体+attP-ccdB-attP

缩减成一步:attB-目的基因-attB+带attP序列和ccdB的表达载体(——BP重组反应——>)带attL和目的基因的表达载体+attR-ccdB-attR

接触Gateway克隆不久还在学习中, 问题愚拙,还请谅解。期待大家的讨论
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Huobol

至尊木虫 (著名写手)

答案在说明书里,有一步法介绍吧

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让羽毛再飞一会儿
2楼2018-03-08 13:34:22
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赵英0709

新虫 (小有名气)

3楼2018-03-15 11:52:19
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赵英0709

新虫 (小有名气)

你用这个酶,你都不看看原理……

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4楼2018-03-15 11:52:55
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赵英0709

新虫 (小有名气)

你以为别人都傻得要做两步啊

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5楼2018-03-15 11:53:15
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木星海

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 赵英0709 at 2018-03-15 11:53:15
你以为别人都傻得要做两步啊

问题问的不好你又何必浪费时间来回答? 还连回答三条  后两条除了讽刺嘲笑 有实际意义?
我爱小木虫!
6楼2018-03-16 09:25:27
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木星海

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by Huobol at 2018-03-08 13:34:22
答案在说明书里,有一步法介绍吧

谢谢, 我们是订了一个flexi系统的克隆试剂盒 我就同时在网上了解其他克隆方法 所以也没翻说明书 哈哈 见笑了 我仔细学习了一遍 明白了
我爱小木虫!
7楼2018-03-16 09:26:50
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赵英0709

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 木星海 at 2018-03-16 09:25:27
问题问的不好你又何必浪费时间来回答? 还连回答三条  后两条除了讽刺嘲笑 有实际意义?...

不是你问题问的不好,没弄清楚之前多幼稚的问题都有,只是在做实验的过程中不仔细看清说明或者原理吃大亏。我就在getway栽过跟头,这话给你说也给我说~哈哈

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8楼2018-03-16 11:10:17
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活的精彩2015

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 赵英0709 at 2018-03-16 11:10:17
不是你问题问的不好,没弄清楚之前多幼稚的问题都有,只是在做实验的过程中不仔细看清说明或者原理吃大亏。我就在getway栽过跟头,这话给你说也给我说~哈哈
...

你好,LR反应时忘了加蛋白酶K终止酶活影响大吗?

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9楼2018-08-29 09:52:24
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