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sabrinna01

银虫 (小有名气)

[交流] 【请教】细胞吞噬纳米材料的TEM SEM 样品怎么准备?

最近做了些纳米材料,让细胞吞噬进去,想表征一下细胞的TEM,SEM,AFM,具体我该怎么样处理细胞呢?样品如何准备,感谢达人不吝赐教啊

[ Last edited by yusen_1982 on 2009-3-9 at 19:05 ]
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yinmin9521

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
sabrinna01(金币+1):谢谢参与
wgcui(金币+1,VIP+0):欢迎多多讨论。 3-9 15:58
把材料标记荧光,用荧光显微镜观察。
2楼2009-03-09 15:30:44
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cpumantiszj

木虫 (小有名气)


wgcui(金币+1,VIP+0):谢谢! 3-9 22:29
楼上正解,好像没听说过细胞还可以或有必要TEM,SEM的。普通光学(带CCD的)显微镜足够了,细胞的尺寸在10um,免疫细胞应该更大点,根本不用电子显微镜,而且材料如果没有独特的信号,拍到的还是细胞外形,根本反应不出材料的信息。我也认为应该对材料进行特定的荧光标记,然后用荧光显微镜观察。
献丑,哈哈
3楼2009-03-09 20:38:00
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lotus9

木虫 (著名写手)

★ ★
zhangwj(金币+2,VIP+0):谢谢顾问! 3-9 23:45
SEM和TEM都可以做。SEM可以看细胞吞噬纳米粒子的表观现象;TEM可以看粒子在细胞内的情况,并可对纳米粒子进行电子衍射做定性分析。两者都需要戊二醛和锇酸固定处理,看TEM的话还需要包埋并做超薄切片。如果看纳米粒子进入活细胞的过程,就需要对粒子进行荧光标记,采用激光共聚焦显微镜进行观察。

进行TEM观察也很重要,可以了解细胞吞噬纳米粒子后,纳米粒子对细胞的影响情况,进行机理探讨。用普通的显微镜应该只能看到吞噬纳米粒子后的细胞形态的变化,看不到纳米粒子。

[ Last edited by lotus9 on 2009-3-9 at 23:30 ]
4楼2009-03-09 23:23:36
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whn732

禁虫 (正式写手)

★ ★
zhangwj(金币+2,VIP+0):谢谢顾问! 3-9 23:45
SEM的制样之前有个帖子讲的挺细,楼主可以找找。TEM做细胞的话要超薄切片,我也没做过。lz是要看纳米颗粒被吞噬到细胞内部是吧,那SEM能看到吗?估计还是用TEM比较好,但要找到被吞噬的材料可能也比较费劲了。二楼说用荧光标记,这个方法应该比较理想,把纳米粒子用荧光标记,那被吞噬后也可以用荧光显微镜看到。不过能说具体点吗?
5楼2009-03-09 23:39:15
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refnew

专家顾问 (知名作家)


wgcui(金币+0,VIP+0):谢谢!!欢迎多多交流! 3-10 09:00
还是做冷冻tem吧,现在染色的很多杂志都不接受了
6楼2009-03-10 08:32:53
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shenyang24

木虫 (正式写手)

wgcui(金币+0,VIP+0):欢迎常来生物材料版 4-28 08:20
请教:如何让细胞吞噬纳米尺寸的材料?我发现单纯的将纳米材料加到培养基里面与细胞共培养效果不好,纳米颗粒很快沉到培养皿底部,细胞在其表面贴壁生长,细胞毒性结果与阴性对照差异不大。
7楼2009-04-27 21:56:32
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