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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » GE的16/600 75pg的柱子 压力升高
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半点心

金虫 (正式写手)

[求助] GE的16/600 75pg的柱子 压力升高 已有2人参与

我有一根GE的16/600 75pg的柱子，柱体积120ml, 跑了3个样品后，样品buffer为（100mM Nacl, 10mM 磷酸钠）。 之后用水冲洗，开始流速0.5ml/min，柱压0.18Mpa。 走到350ml的时候，柱压升高到0.28Mpa。 是怎么回事呢？换成水后，柱压怎么在一直升高。柱子是新的，才跑了3个样。
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该签名无法显示,系统分析两种可能:一.你需要重新启动电脑;二.你的诚意不够,欲解决,马上邀请该联系人吃饭..
1楼 2018-02-10 17:52:15
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zsygxh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

压力升高一般是有蛋白在柱上沉淀了，NaOH清一下柱子，注意控制压力，尤其ΔP别超。如果系统压大，而ΔP正常的话，那么就是系统堵了，一般是在线滤器堵了，拆下来超声一下就好了。如果ΔP压力大就清柱吧，可能清柱过程中压力会越来越大，注意控制，清完就正常了。以后用柱子前，先确认你的蛋白在过柱的这个buffer里稳不稳定，不稳定就换个buffer，不然蛋白容易部分或全部在柱上沉淀。我们实验室总有人图便捷，不管什么蛋白就喜欢用一个buffer过柱子，然后柱子压力经常往上升，这个习惯很不好。
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5楼2018-02-24 17:00:05
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

一定的体积流速对应一定的压力，增大流速压力升高，这是必然现象。首先你用完柱子后是需要对柱子按照清洗再生的操作方法，洗掉柱子上的非特异性吸附物质，防止柱子填料因为残留样品的原因反压增大，也便于下次使用，延长柱子寿命，再就是要清洗AKTA等纯化系统的管路。至于用水走，压力升高到0.28Mpa，请问对应的体积流速是多少呢？增大体积流速，压力升高也是正常的。AKTA用纯水和0.1M NaCl走柱子（测新填料强度及流速和耐压）在增大体积流速时压力也是会增大的最大可到0.4Mpa，对应的流速会在25ml/min左右。希望对你有所帮助。
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4楼2018-02-24 09:21:20
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dlzhkkk

捐助贵宾 (职业作家)
所有液体是否过滤？

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2楼2018-02-12 05:57:55
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半点心

金虫 (正式写手)
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2楼: Originally posted by dlzhkkk at 2018-02-12 05:57:55
所有液体是否过滤？

已经过滤了啊

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3楼2018-02-23 19:42:45
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半点心

金虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by walking dead at 2018-02-24 09:21:20
一定的体积流速对应一定的压力，增大流速压力升高，这是必然现象。首先你用完柱子后是需要对柱子按照清洗再生的操作方法，洗掉柱子上的非特异性吸附物质，防止柱子填料因为残留样品的原因反压增大，也便于下次使用， ...

谢谢您的详细的回复，不好意思才看到您的回复哦，我一直用的0.5ml/min的流速走的，走了350ml, 柱压从0.18Mpa升到0.28Mpa，而且用的是水。我的柱子分离的是RNA，比蛋白还要小啊
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6楼2018-03-02 16:12:12
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半点心

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zsygxh at 2018-02-24 17:00:05
压力升高一般是有蛋白在柱上沉淀了，NaOH清一下柱子，注意控制压力，尤其ΔP别超。如果系统压大，而ΔP正常的话，那么就是系统堵了，一般是在线滤器堵了，拆下来超声一下就好了。如果ΔP压力大就清柱吧，可能清柱过 ...

谢谢您的回复，请问下ΔP在哪里看呢。我过的是RNA，是反转录的，体系里面可能有一些蛋白质。但是也不会那么多啊
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7楼2018-03-02 16:13:41
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zsygxh

金虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 半点心 at 2018-03-02 16:13:41
谢谢您的回复，请问下ΔP在哪里看呢。我过的是RNA，是反转录的，体系里面可能有一些蛋白质。但是也不会那么多啊...

在界面上有。那么就不是蛋白沉淀了，而是RNA的问题了，我以前做蛋白和RNA的相互作用，也有碰到过压力升高问题，友情提醒一下，过RNA前务必每次都要用NaOH处理柱子，不然RNA必然会在柱上残留(可能是非特异离子吸附)，然后污染下个样品，别问我怎么知道的。

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8楼2018-03-02 20:06:52
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半点心

金虫 (正式写手)
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8楼: Originally posted by zsygxh at 2018-03-02 20:06:52
在界面上有。那么就不是蛋白沉淀了，而是RNA的问题了，我以前做蛋白和RNA的相互作用，也有碰到过压力升高问题，友情提醒一下，过RNA前务必每次都要用NaOH处理柱子，不然RNA必然会在柱上残留(可能是非特异离子吸附) ...

您碰到问题是怎么解决的呢，用NaOH洗吗？浓度是多少呀，洗多少个柱体积啊？好郁闷啊，就跑了三个样，柱子就这样了。

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9楼2018-03-04 14:15:40
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zsygxh

金虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 半点心 at 2018-03-04 14:15:40
您碰到问题是怎么解决的呢，用NaOH洗吗？浓度是多少呀，洗多少个柱体积啊？好郁闷啊，就跑了三个样，柱子就这样了。
...

清洗看说明书，你都没写清楚用的什么柱子，分子筛一般0.5M，我一般冲1CV，换水换buffer，如果堵得严重可以多冲几个CV。

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半点心
10楼2018-03-04 22:01:50
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