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半点心

金虫 (正式写手)

[求助] GE的16/600 75pg的柱子 压力升高 已有2人参与

我有一根GE的16/600 75pg的柱子,柱体积120ml, 跑了3个样品后,样品buffer为(100mM Nacl, 10mM 磷酸钠)。 之后用水冲洗,开始流速0.5ml/min,柱压0.18Mpa。 走到350ml的时候,柱压升高到0.28Mpa。 是怎么回事呢?换成水后,柱压怎么在一直升高。柱子是新的,才跑了3个样。
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家


【答案】应助回帖

一定的体积流速对应一定的压力,增大流速压力升高,这是必然现象。首先你用完柱子后是需要对柱子按照清洗再生的操作方法,洗掉柱子上的非特异性吸附物质,防止柱子填料因为残留样品的原因反压增大,也便于下次使用,延长柱子寿命,再就是要清洗AKTA等纯化系统的管路。至于用水走,压力升高到0.28Mpa,请问对应的体积流速是多少呢?增大体积流速,压力升高也是正常的。AKTA用纯水和0.1M NaCl走柱子(测新填料强度及流速和耐压)在增大体积流速时压力也是会增大的最大可到0.4Mpa,对应的流速会在25ml/min左右。希望对你有所帮助。
4楼2018-02-24 09:21:20
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dlzhkkk

捐助贵宾 (职业作家)

欢迎交流
2楼2018-02-12 05:57:55
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半点心

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dlzhkkk at 2018-02-12 05:57:55
所有液体是否过滤?

已经过滤了啊

发自小木虫Android客户端
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3楼2018-02-23 19:42:45
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zsygxh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

压力升高一般是有蛋白在柱上沉淀了,NaOH清一下柱子,注意控制压力,尤其ΔP别超。如果系统压大,而ΔP正常的话,那么就是系统堵了,一般是在线滤器堵了,拆下来超声一下就好了。如果ΔP压力大就清柱吧,可能清柱过程中压力会越来越大,注意控制,清完就正常了。以后用柱子前,先确认你的蛋白在过柱的这个buffer里稳不稳定,不稳定就换个buffer,不然蛋白容易部分或全部在柱上沉淀。我们实验室总有人图便捷,不管什么蛋白就喜欢用一个buffer过柱子,然后柱子压力经常往上升,这个习惯很不好。
5楼2018-02-24 17:00:05
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