| 查看: 2060 | 回复: 6 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
duzhibing木虫 (小有名气)
|
[交流]
求教降落PCR程序的设定
|
||
| 我的实验需要用降落PCR程序进行扩增，但是我不会设定降落PCR程序，哪位高手可以把程序设定步骤说一下，不胜感激。我们实验室的PCR仪是Biometra的。 |
回复此楼» 猜你喜欢
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有4人回复
-
纳米粒子粒径的测量
已经有8人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有14人回复
-
计算机、0854电子信息（085401-058412）调剂
已经有5人回复
-
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有5人回复
-
溴的反应液脱色
已经有7人回复
-
推荐一本书
已经有12人回复
-
基金申报
已经有4人回复
-
常年博士招收(双一流，工科)
已经有4人回复
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2009-03-08 16:59:11
sutao1979
木虫 (著名写手)
小木虫10年groupleader
- BioEPI: 1
- 应助: 5 (幼儿园)
- 贵宾: 0.694
- 金币: 3553.3
- 散金: 150
- 红花: 3
- 帖子: 1479
- 在线: 64小时
- 虫号: 79951
- 注册: 2005-07-12
- 性别: GG
- 专业: 植物分类学
3楼2009-03-08 18:29:17
your2007
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 22507.1
- 红花: 8
- 帖子: 2517
- 在线: 324.4小时
- 虫号: 710330
- 注册: 2009-02-27
- 专业: 微生物遗传育种学
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
duzhibing(金币+10,VIP+0):谢谢，有两个答案，所以每人10个了，非常感谢！ 3-9 09:59
duzhibing(金币+10,VIP+0):谢谢，有两个答案，所以每人10个了，非常感谢！ 3-9 09:59
|
同样楼上，其实在普通PCR仪上设置降落pcr的程序很简单，只要常规的PCR程序会设计，这就好办，首先根据引物上的Tm值设计第一轮的程序，当然，要选引物所给Tm值低的那个，然后在循环4轮，每轮降1度，在PCR仪上多摸索几次，最后就是设计普通PCR的程序了，比如： 1、95度 5分钟 2、94度 50秒 3、60度 45秒 +（这个加号应该在PCR仪上显示） 4、72度 2分钟 2 5 5、94度 50秒 6、55度 45秒 7、72度 2分钟 5 25 8、72度 10分钟 9、16度 X分钟 [ Last edited by your2007 on 2009-3-8 at 19:31 ] |
4楼2009-03-08 19:29:25
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
duzhibing(金币+10,VIP+0):谢谢，有两个答案，所以每人10个了，非常感谢！ 3-9 09:59
小木虫: 金币+2, 帖子真精彩 2014-04-18 15:21:52
duzhibing(金币+10,VIP+0):谢谢，有两个答案，所以每人10个了，非常感谢！ 3-9 09:59
小木虫: 金币+2, 帖子真精彩 2014-04-18 15:21:52
|
大家好，我最近用到了touchdown PCR程序，一开始不会设置，后来在园子里面搜也没有搜到，昨天折腾了一整天，终于把Biometra PCR仪以及GeneAmp PCR system 2700型号 PCR 仪的touchdown程序都搞明白了。鉴于大家一般用的都是Biometra PCR，我就把Biometra PCR仪的touchdown程序设置写到这里，供大家参考使用。(我以退火温度从65度降到55度为例，每个循环降0.5度，共需20个循环，然后再继续55度退火的5个循环，战友们根据自己情况再调整） （1）首先是开机打开主页面-----按C键（programme）进入到---列表页面-----通过方向键选择一个subdirect-----按enter进入-----输入你的programme no 和name----再enter----设置lid temp:99度和preheating: on----继续按enter进入---输入 1：94度 5min 2：94度 1min 3：65度 1min（然后连按向右的方向键3下，进入到另一个界面，在 标闪烁处（也就是3的后面）输入-0.5（其上方为dt）， 其他的不管，然后，再连续按enter键回到编程的主页 面，此时（65 度 1min 后面会显示一个加号） 4：72度 1min 2 19（Biometra PCR 本身加一个反应即20个循环） 5：94度 1min 6： 55度 1min 7： 72度 1min 5 4（Biometra PCR 本身加一个反应即5个循环） 8：72度 10min 9 ：4度 10h 好了，一个touchdown程序就设好了，本来想照了图片对应说，但是借别人的相机，界面照得不清楚，只好这样写出来了，也不知道说清楚了没有。 最后，祝大家试验顺利！ |
5楼2009-03-08 19:35:22
ghx2005
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 130
- 散金: 13
- 帖子: 27
- 在线: 8小时
- 虫号: 435090
- 注册: 2007-08-19
- 性别: MM
- 专业: 生物化学与分子生物学
6楼2009-03-09 09:15:40
2008116068
木虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 4612.6
- 散金: 294
- 红花: 3
- 帖子: 1115
- 在线: 364.5小时
- 虫号: 701164
- 注册: 2009-02-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2009-07-19 21:52:48