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duzhibing木虫 (小有名气)
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[交流]
求教降落PCR程序的设定
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| 我的实验需要用降落PCR程序进行扩增，但是我不会设定降落PCR程序，哪位高手可以把程序设定步骤说一下，不胜感激。我们实验室的PCR仪是Biometra的。 |
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duzhibing(金币+10,VIP+0):谢谢，有两个答案，所以每人10个了，非常感谢！ 3-9 09:59
小木虫: 金币+2, 帖子真精彩 2014-04-18 15:21:52
duzhibing(金币+10,VIP+0):谢谢，有两个答案，所以每人10个了，非常感谢！ 3-9 09:59
小木虫: 金币+2, 帖子真精彩 2014-04-18 15:21:52
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大家好，我最近用到了touchdown PCR程序，一开始不会设置，后来在园子里面搜也没有搜到，昨天折腾了一整天，终于把Biometra PCR仪以及GeneAmp PCR system 2700型号 PCR 仪的touchdown程序都搞明白了。鉴于大家一般用的都是Biometra PCR，我就把Biometra PCR仪的touchdown程序设置写到这里，供大家参考使用。(我以退火温度从65度降到55度为例，每个循环降0.5度，共需20个循环，然后再继续55度退火的5个循环，战友们根据自己情况再调整） （1）首先是开机打开主页面-----按C键（programme）进入到---列表页面-----通过方向键选择一个subdirect-----按enter进入-----输入你的programme no 和name----再enter----设置lid temp:99度和preheating: on----继续按enter进入---输入 1：94度 5min 2：94度 1min 3：65度 1min（然后连按向右的方向键3下，进入到另一个界面，在 标闪烁处（也就是3的后面）输入-0.5（其上方为dt）， 其他的不管，然后，再连续按enter键回到编程的主页 面，此时（65 度 1min 后面会显示一个加号） 4：72度 1min 2 19（Biometra PCR 本身加一个反应即20个循环） 5：94度 1min 6： 55度 1min 7： 72度 1min 5 4（Biometra PCR 本身加一个反应即5个循环） 8：72度 10min 9 ：4度 10h 好了，一个touchdown程序就设好了，本来想照了图片对应说，但是借别人的相机，界面照得不清楚，只好这样写出来了，也不知道说清楚了没有。 最后，祝大家试验顺利！ |
5楼2009-03-08 19:35:22
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
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2楼2009-03-08 16:59:11
sutao1979
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3楼2009-03-08 18:29:17
your2007
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duzhibing(金币+10,VIP+0):谢谢，有两个答案，所以每人10个了，非常感谢！ 3-9 09:59
duzhibing(金币+10,VIP+0):谢谢，有两个答案，所以每人10个了，非常感谢！ 3-9 09:59
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同样楼上，其实在普通PCR仪上设置降落pcr的程序很简单，只要常规的PCR程序会设计，这就好办，首先根据引物上的Tm值设计第一轮的程序，当然，要选引物所给Tm值低的那个，然后在循环4轮，每轮降1度，在PCR仪上多摸索几次，最后就是设计普通PCR的程序了，比如： 1、95度 5分钟 2、94度 50秒 3、60度 45秒 +（这个加号应该在PCR仪上显示） 4、72度 2分钟 2 5 5、94度 50秒 6、55度 45秒 7、72度 2分钟 5 25 8、72度 10分钟 9、16度 X分钟 [ Last edited by your2007 on 2009-3-8 at 19:31 ] |
4楼2009-03-08 19:29:25
