应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR的退火温度怎么选择
61/1返回列表
查看: 873  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

muchong5577

金虫 (正式写手)

[交流] PCR的退火温度怎么选择

请问大家，PCR的退火温度一般是怎么确定的？
我想一次在一台PCR仪上扩下列片段，请问怎么确定一个统一的退火温度？
1. PCR产物长度1002bp、GC：70.7% ； P. 5.0 给出的最佳退火温度为67.5摄氏度。
2. 1089bp、70.5%；  66.7
3. 825bp、 70.1%；  67.3
4. 1170bp、70.4%；  65.4
5. 828bp、 64.6%；  63.8
6. 1938bp、68.4%；  66.0
7. 891bp、 72.8%；  66.7
8. 1206bp、67.2%；  65.3
9. 912bp、 72.3%；  66.9
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-03-06 13:17:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmchen1015

银虫 (小有名气)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 3-6 20:10
58C，如果是有模板的话，58C或再低一些都可以，其实退火温度不需要刻意去要求，一般的PCR，52-60C就可以全解决。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-03-06 13:57:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aga0110125

银虫 (小有名气)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 3-6 20:11
引物特异性够好的话，退火温度不是问题
赞一下 回复此楼
3楼2009-03-06 14:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmjiang

银虫 (小有名气)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 3-6 20:11
GC：70.7% 含量太高了
60度吧
赞一下 回复此楼
4楼2009-03-06 14:39:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muchong5577

金虫 (正式写手)
刚才跑胶得出的结果
九个只扩出来一个
赞一下 回复此楼
5楼2009-03-07 15:31:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sail000000

铜虫 (小有名气)
GC含量太高了，退火温度太高了，都快到延伸温度了，60度左右差不多，不行的话你可以试试touch-down啊！
赞一下 回复此楼
6楼2009-03-07 18:34:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 muchong5577 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭