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wpllrm

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr时 目的条带不亮 引物二聚体明显为什么？ 已有2人参与

大家好 我是实验新手 最近pcr产物电泳时发现目的条带不亮 但是有 而引物二聚体很明显 求各位大神指导。pcr条件预变性95度五分钟 变性95度三十秒 退火55度三十秒 延伸72度1分钟 总延伸72度5分钟42个循环。

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1楼 2018-01-30 15:53:04
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-01-31 11:06:44
你这个问题可以通过调节退火温度来解决。对于样本很多实验，引物拿到后，可以设置一个温度梯度的pcr，确定这个引物的最佳退火温度。如果是你自己设计引物的话，比Tm值低2-3度即可选择为退火温度，这个视具体情况而定。还可以通过二轮pcr富集你的目的条带，总之途径很多。你可以参考一下。
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2楼2018-01-30 17:05:19
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karisq33

铜虫 (小有名气)
引物不匹配吧

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3楼2018-01-30 17:07:11
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wpllrm

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2018-01-30 17:05:19
你这个问题可以通过调节退火温度来解决。对于样本很多实验，引物拿到后，可以设置一个温度梯度的pcr，确定这个引物的最佳退火温度。如果是你自己设计引物的话，比Tm值低2-3度即可选择为退火温度，这个视具体情况而定 ...

谢谢我在摸索摸索

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4楼2018-01-30 18:06:04
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寒悍

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
发个电泳结果图片吧，看跟我之前的问题一样不？
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直面惨淡人生的猛男
5楼2018-01-31 01:16:38
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