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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于点突变转化效率低的问题
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cathy97031

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于点突变转化效率低的问题 已有1人参与

用天根的快速定点突变试剂盒做点突变的时候，PCR结束后电泳，产物非常少，条带很不清晰
用于做后续的转化时，转化效率特别低，要么长不出来，要么只能长出一两个菌落，加大质粒的量（由5微升加大到15微升）也无济于事
重复好多次都是这样，PCR条带淡，转化不出来
现在要继续加大转化质粒的量吗？加到30微升？
求解？感谢！
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1楼 2018-01-30 11:14:22
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉你把PCR做好才是关键。后面的连接转化可能效率高些
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2018-01-30 11:27:02
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hzau103

新虫 (正式写手)
优化PCR体系

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3楼2018-01-30 11:41:25
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cathy97031

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hzau103 at 2018-01-30 11:41:25
优化PCR体系

主要考虑退火温度？还是模板、引物浓度呢？
赞一下 回复此楼
4楼2018-01-30 11:55:12
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qawsedfrfr

新虫 (小有名气)
转大肠吗？你这感受态细胞有问题，都有条带了，就是没p出东西，单你这些质粒都够转化长出来了。

发自小木虫Android客户端
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5楼2018-02-26 01:07:30
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