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liuxinchao

新虫 (正式写手)


已领完
欲哭无泪
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最近做pcr一直p不出来,然后我就将第一次做的pcr产物为模板做的巢式pcr,第二次pcr的引物是我自己在第一次的扩增片段设计的引物 目的条带长度大约为250bp,但是做巢式的时候,水也p出来了,这就是假阳性吧!跪求各位大神 怎么办啊?感觉生活失去了希望

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这种是污染,很难控制好。因为污染无处不在,世界难题。
非常严格的实验都是PCR前后两个房间
换实验台,试剂水全换新,primer重新稀释。
10楼2018-01-29 11:40:55
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遊俠

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同意楼上说的,污染!

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11楼2018-01-29 23:02:20
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stabilized

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
休息几天再做,休息几天再做,休息几天再做,除模版外都换新试试。
12楼2018-01-30 11:01:17
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liuxinchao

新虫 (正式写手)


引用回帖:
10楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-01-29 11:40:55
这种是污染,很难控制好。因为污染无处不在,世界难题。
非常严格的实验都是PCR前后两个房间
换实验台,试剂水全换新,primer重新稀释。

好的!谢谢

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13楼2018-01-30 11:12:18
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liuxinchao

新虫 (正式写手)


引用回帖:
12楼: Originally posted by stabilized at 2018-01-30 11:01:17
休息几天再做,休息几天再做,休息几天再做,除模版外都换新试试。

感觉快被逼疯了

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14楼2018-01-30 11:14:00
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liuxinchao

新虫 (正式写手)


引用回帖:
11楼: Originally posted by 遊俠 at 2018-01-29 23:02:20
同意楼上说的,污染!

嗯!谢谢

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15楼2018-01-30 11:14:11
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clq950221

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近在做巢式pcr,求助各位大神:
1.一次扩增的模板无法定量的条件下,加多少合适?
2.一次扩增产物进行产物纯化,可否定量稀释到确定的量再进行二次扩增?
3.如果将一次扩增产物进行纯化定量,那么这种方法的灵敏度和特异性该如何考察?
16楼2018-05-24 14:53:59
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QH_XU

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我之前也有过类似的经历,还是要注意操作手法干净利落,每次操作都更换枪头,不要让试剂相互污染。可以尝试水用完后,就冻到冰箱里面,每次用再解冻,我们导师教的

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17楼2018-05-24 15:45:57
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0918200532楼
2018-01-29 09:43   回复  
liuxinchao(金币+1): 谢谢参与
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2018-01-29 09:43   回复  
liuxinchao(金币+2): 谢谢参与
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2018-01-29 09:44   回复  
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andrewhf5楼
2018-01-29 09:44   回复  
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2018-01-29 09:45   回复  
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2018-01-29 09:47   回复  
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