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liuxinchao
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最近做pcr一直p不出来,然后我就将第一次做的pcr产物为模板做的巢式pcr,第二次pcr的引物是我自己在第一次的扩增片段设计的引物 目的条带长度大约为250bp,但是做巢式的时候,水也p出来了,这就是假阳性吧!跪求各位大神 怎么办啊?感觉生活失去了希望
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这种是污染,很难控制好。因为污染无处不在,世界难题。
非常严格的实验都是PCR前后两个房间
换实验台,试剂水全换新,primer重新稀释。
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2018-01-29 11:40:55
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同意楼上说的,污染!
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休息几天再做,休息几天再做,休息几天再做,除模版外都换新试试。
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Originally posted by
drwhoknowss
at 2018-01-29 11:40:55
这种是污染,很难控制好。因为污染无处不在,世界难题。
非常严格的实验都是PCR前后两个房间
换实验台,试剂水全换新,primer重新稀释。
好的!谢谢
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stabilized
at 2018-01-30 11:01:17
休息几天再做,休息几天再做,休息几天再做,除模版外都换新试试。
感觉快被逼疯了
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遊俠
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同意楼上说的,污染!
嗯!谢谢
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最近在做巢式pcr,求助各位大神:
1.一次扩增的模板无法定量的条件下,加多少合适?
2.一次扩增产物进行产物纯化,可否定量稀释到确定的量再进行二次扩增?
3.如果将一次扩增产物进行纯化定量,那么这种方法的灵敏度和特异性该如何考察?
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16楼
2018-05-24 14:53:59
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我之前也有过类似的经历,还是要注意操作手法干净利落,每次操作都更换枪头,不要让试剂相互污染。可以尝试水用完后,就冻到冰箱里面,每次用再解冻,我们导师教的
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17楼
2018-05-24 15:45:57
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