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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 欲哭无泪
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liuxinchao

新虫 (正式写手)
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欲哭无泪
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最近做pcr一直p不出来，然后我就将第一次做的pcr产物为模板做的巢式pcr，第二次pcr的引物是我自己在第一次的扩增片段设计的引物 目的条带长度大约为250bp，但是做巢式的时候，水也p出来了，这就是假阳性吧！跪求各位大神 怎么办啊？感觉生活失去了希望

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1楼 2018-01-29 09:41:26
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这种是污染，很难控制好。因为污染无处不在，世界难题。
非常严格的实验都是PCR前后两个房间
换实验台，试剂水全换新，primer重新稀释。
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10楼2018-01-29 11:40:55
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遊俠

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同意楼上说的，污染！

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11楼2018-01-29 23:02:20
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stabilized

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
休息几天再做，休息几天再做，休息几天再做，除模版外都换新试试。
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12楼2018-01-30 11:01:17
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liuxinchao

新虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-01-29 11:40:55
这种是污染，很难控制好。因为污染无处不在，世界难题。
非常严格的实验都是PCR前后两个房间
换实验台，试剂水全换新，primer重新稀释。

好的！谢谢

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13楼2018-01-30 11:12:18
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liuxinchao

新虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by stabilized at 2018-01-30 11:01:17
休息几天再做，休息几天再做，休息几天再做，除模版外都换新试试。

感觉快被逼疯了

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14楼2018-01-30 11:14:00
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liuxinchao

新虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 遊俠 at 2018-01-29 23:02:20
同意楼上说的，污染！

嗯！谢谢

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15楼2018-01-30 11:14:11
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clq950221

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最近在做巢式pcr，求助各位大神：
1.一次扩增的模板无法定量的条件下，加多少合适？
2.一次扩增产物进行产物纯化，可否定量稀释到确定的量再进行二次扩增？
3.如果将一次扩增产物进行纯化定量，那么这种方法的灵敏度和特异性该如何考察？
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16楼2018-05-24 14:53:59
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QH_XU

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我之前也有过类似的经历，还是要注意操作手法干净利落，每次操作都更换枪头，不要让试剂相互污染。可以尝试水用完后，就冻到冰箱里面，每次用再解冻，我们导师教的

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17楼2018-05-24 15:45:57
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0918200532楼
2018-01-29 09:43   回复  
liuxinchao(金币+1): 谢谢参与
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xiao青蛙3楼
2018-01-29 09:43   回复  
liuxinchao(金币+2): 谢谢参与
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home微雪4楼
2018-01-29 09:44   回复  
liuxinchao(金币+1): 谢谢参与
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andrewhf5楼
2018-01-29 09:44   回复  
liuxinchao(金币+1): 谢谢参与
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黄文元16楼
2018-01-29 09:45   回复  
liuxinchao(金币+2): 谢谢参与
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turepsyche7楼
2018-01-29 09:45   回复  
liuxinchao(金币+1): 谢谢参与
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Cherish521g8楼
2018-01-29 09:46   回复  
liuxinchao(金币+1): 谢谢参与
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gao199207079楼
2018-01-29 09:47   回复  
liuxinchao(金币+1): 谢谢参与
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