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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助QRT-PCR 内参问题，内参在不同组表达差异较大
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anona

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助QRT-PCR 内参问题，内参在不同组表达差异较大 已有2人参与

荧光定量内参 actin 和 GADPH都是对照组和处理组相差2左右，做了两次都这样，想问一下可能的原因是什么，有什么解决办法吗？
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1楼 2018-01-28 21:09:54
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会务工作者
^_^

发自小木虫IOS客户端
2楼2018-01-28 21:17:31
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重新处理一批样试试。

发自小木虫Android客户端
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3楼2018-01-28 22:35:17
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
QRT-PCR都是相对定量。他们自身是内参，你怎么知道对照组和处理组相差2呢？
如果是Cq的差异，那是样品浓度的问题。太正常了
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

anona
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2018-01-29 00:22:55
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anona

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-01-29 00:22:55
QRT-PCR都是相对定量。他们自身是内参，你怎么知道对照组和处理组相差2呢？
如果是Cq的差异，那是样品浓度的问题。太正常了

感谢回复。对照组和处理组内参出现了统计学差异，计算的时候所有的基因都出现下调趋势，许多与预期相反。
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5楼2018-01-29 07:53:10
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预估预估

新虫 (正式写手)
RNA有没有问题？

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我就是我，我就是人间不一样的烟火。
6楼2018-02-01 23:30:29
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anona

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 预估预估 at 2018-02-01 23:30:29
RNA有没有问题？

RNA浓度500+，OD260/280在1.8-2.1之间，没有跑胶。
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7楼2018-02-02 16:12:31
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预估预估

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by anona at 2018-02-02 16:12:31
RNA浓度500+，OD260/280在1.8-2.1之间，没有跑胶。...

那应该没有问题。

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我就是我，我就是人间不一样的烟火。
8楼2018-02-02 19:24:40
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