应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原核表达中，为何诱导不出来？
41/1返回列表
查看: 570  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

kuaile2008

[交流] 原核表达中，为何诱导不出来？

最近构建好的转化子，跑电泳条带位置正确，测序目的基因也百分百符合。
不知道为何就是诱导不出来？IPTG，温度，诱导时间都试过，跑蛋白电泳还是没条带，急啊，不知原因何在？请表达高手指教！
另：我用的载体是PET32a,用大肠杆菌BL21原核表达，目的基因100多bp。

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-11 at 16:15 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-03-05 10:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

轻5飞扬

金虫 (正式写手)
不出来的原因很多,可以试试换换菌株,BL21是最早用的,可以试试DE3和rosta(忘记是不是这样写了)
赞一下 回复此楼
2楼2009-03-05 12:50:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)
PET32a 是T7启动子，要用BL21（DE3）和Rosetta（DE3）才行，宿主没有DE3是不行的哦！
要是用BL21（DE3）和Rosetta（DE3）表达还不出来的话，你用一个确定能表达过其它基因的PET32a ，因为表达载体几经传手后，可能会出错的，我就经常发现同一批重组子里，测序都正确，但有的表达很好，有的没有表达，就是表达载体出错了。。。
赞一下 回复此楼
3楼2009-03-08 02:00:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kuaile2008

谢谢各位的热心帮助，我诱导失败的原因找到了，是SDS上样缓冲液的问题，可能是原来的BUFFER保存时间太长了不好用，原来是5X的，我新配置2 X的，蛋白电泳就跑的很不错了，下面是我的上样缓冲液的配方：
2X SDS加样缓冲液:
    100mmo1/L   Tris HCl (pH6.8)
    200mmol/L    二硫苏糖醇(DTT)
    2.0%         SDS
    0.03%        溴酚蓝
  20%         甘油
谢谢各位！
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-03-11 10:07:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kuaile2008 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 316求调剂 +9 梁茜雯 2026-03-19 9/450 2026-03-25 23:01 by peike
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 材料与化工 322求调剂 +6 然11 2026-03-19 6/300 2026-03-25 18:37 by haxia
[考研] 26考研-291分-厦门大学（085601）-柔性电子学院材料工程专业求调剂 +3 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:22 by xcjcqu
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 11/550 2026-03-25 16:17 by 87639
[考研] 303求调剂 +6 元夕元 2026-03-20 7/350 2026-03-25 12:00 by edmund7
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +3 SYA！ 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭