应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原核表达中，为何诱导不出来？
41/1返回列表
查看: 567  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

kuaile2008

[交流] 原核表达中，为何诱导不出来？

最近构建好的转化子，跑电泳条带位置正确，测序目的基因也百分百符合。
不知道为何就是诱导不出来？IPTG，温度，诱导时间都试过，跑蛋白电泳还是没条带，急啊，不知原因何在？请表达高手指教！
另：我用的载体是PET32a,用大肠杆菌BL21原核表达，目的基因100多bp。

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-11 at 16:15 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-03-05 10:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

轻5飞扬

金虫 (正式写手)
不出来的原因很多,可以试试换换菌株,BL21是最早用的,可以试试DE3和rosta(忘记是不是这样写了)
赞一下 回复此楼
2楼2009-03-05 12:50:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)
PET32a 是T7启动子，要用BL21（DE3）和Rosetta（DE3）才行，宿主没有DE3是不行的哦！
要是用BL21（DE3）和Rosetta（DE3）表达还不出来的话，你用一个确定能表达过其它基因的PET32a ，因为表达载体几经传手后，可能会出错的，我就经常发现同一批重组子里，测序都正确，但有的表达很好，有的没有表达，就是表达载体出错了。。。
赞一下 回复此楼
3楼2009-03-08 02:00:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kuaile2008

谢谢各位的热心帮助，我诱导失败的原因找到了，是SDS上样缓冲液的问题，可能是原来的BUFFER保存时间太长了不好用，原来是5X的，我新配置2 X的，蛋白电泳就跑的很不错了，下面是我的上样缓冲液的配方：
2X SDS加样缓冲液:
    100mmo1/L   Tris HCl (pH6.8)
    200mmol/L    二硫苏糖醇(DTT)
    2.0%         SDS
    0.03%        溴酚蓝
  20%         甘油
谢谢各位！
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-03-11 10:07:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kuaile2008 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭