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酵母破碎方案拿去
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多年的生化、遗传学及分子分析研究所得的大量研究结果，使酵母成为生物制药研究者首选的模式生物系统和工具。因此，酵母成为普遍的基因表达研究和重组蛋白的常见载体。尽管研究用的酵母种属有多种，包括毕赤酵母属、汉逊酵母属和德巴利氏酵母属，但最常用的还是酵母菌属。 使用传统的酶分解法通常很难从细胞中提取完整的酵母mRNA和细胞内蛋白。裂解酶通常是粗制备，包含的RNA酶和蛋白酶不仅会破坏细胞壁，还会破坏目标分子。而且，酶裂解出原生质体通常需要加入去垢剂，而去垢剂会造成多种蛋白质失活。因此，机械裂解或破坏酵母细胞通常需要释放一些小分子。 1、破碎前的准备： 0.1g菌体（本实验以0.1g菌体为例）；直径10号钢珠；研磨机；50ML研磨罐。 2、研磨。 0.1g菌体加入30ML PBS溶液，混匀后用移液器均匀滴入液氮中，收集液氮冻住的小球，将小球放入预冷过的研磨罐中，调整频率为65Hz，震荡时间20S。取下研磨罐再次放入液氮预冷15-20S取出来再次上机研磨。重复3次。 具体实验具体分析    发自小木虫IOS客户端 [ Last edited by 小冀- on 2018-1-23 at 09:13 ] |
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3楼2018-01-22 22:31:06
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