应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 求大神解答，为什么我的TA克隆重组一直连不上去
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 3313  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Michael ~

新虫 (初入文坛)

[交流] 求大神解答，为什么我的TA克隆重组一直连不上去 已有6人参与

我用的载体是PUC19-GFP，目的片段是1300多bp。加A反应体系：dd水 0.3ul，PCR扩增片段 20ul,Buffer 2.5ul,dNTP 2ul.rTaq 0.2ul,反应条件72℃30min。载体骨架和目的片段胶回收纯化之后浓度和纯度都很好，连接体系就是1:2,1:8,1:16都用过，而且也把三种比例放一个板上转化过，都没有成功，一个斑都没有
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-01-22 11:36:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-02-17 12:18:12
PUC19-GFP是T载体吗？T载体一般不都是pXX-T Vector，像pGEM-T、pUC18-T、pMD18-T
我们用takara的pMD™18 -T Vector，云盘是详细的流程，你可以参考下，链接: https://pan.baidu.com/s/1kWYepsb 密码: 8tfa
赞一下 回复此楼
2019更好更棒!
7楼2018-02-05 10:49:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转化对照做了吗？
抗生素？
赞一下 回复此楼
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2018-01-23 03:07:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hubeigxkkk

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-02-17 12:17:56
连接比列不是很关键。你的这个是T载体吗？以前TA克隆有问题吗？感受态有问题吗？你描述的也不清楚，中间很多环节都有可能有问题
赞一下 回复此楼
3楼2018-01-25 15:42:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

遊俠

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个加A体系。。合适吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2018-01-29 23:22:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +8 Y-cap 2026-03-29 11/550 2026-03-30 21:03 by Y-cap
[考研] 求调剂 +10 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 10/500 2026-03-30 18:34 by 544594351
[考研] 材料专硕 085600求调剂 +7 BBQ233 2026-03-30 7/350 2026-03-30 17:44 by oooqiao
[考研] 342求调剂 +4 加油a李zs 2026-03-26 4/200 2026-03-30 16:39 by 晶体之美
[考研] 考研调剂 +5 Sanmu-124 2026-03-26 5/250 2026-03-30 13:36 by chemdavid
[考研] 南京大学化学调剂 +10 景随风 2026-03-29 15/750 2026-03-30 11:21 by limeifeng
[考研] 材料与化工272求调剂 +21 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 21/1050 2026-03-30 10:52 by 晴空210210
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +6 niko- 2026-03-27 6/300 2026-03-30 10:25 by herarysara
[考研] 343求调剂085601 +3 要努力学习x 2026-03-29 3/150 2026-03-29 18:35 by wxiongid
[考研] 329求调剂 +10 钮恩雪 2026-03-25 10/500 2026-03-29 13:32 by peike
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +4 小张zxy张 2026-03-26 8/400 2026-03-28 19:25 by lbsjt
[考研] 312，生物学求调剂 +3 小译同学abc 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:32 by 落睿可思
[考研] 085701环境工程，267求调剂 +16 minht 2026-03-26 16/800 2026-03-28 12:16 by zllcz
[考研] 272求调剂 +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-27 17:23 by laoshidan
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭