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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 求大神解答，为什么我的TA克隆重组一直连不上去
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Michael ~

新虫 (初入文坛)

[交流] 求大神解答，为什么我的TA克隆重组一直连不上去 已有6人参与

我用的载体是PUC19-GFP，目的片段是1300多bp。加A反应体系：dd水 0.3ul，PCR扩增片段 20ul,Buffer 2.5ul,dNTP 2ul.rTaq 0.2ul,反应条件72℃30min。载体骨架和目的片段胶回收纯化之后浓度和纯度都很好，连接体系就是1:2,1:8,1:16都用过，而且也把三种比例放一个板上转化过，都没有成功，一个斑都没有
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1楼 2018-01-22 11:36:43
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hubeigxkkk

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-02-17 12:17:56
连接比列不是很关键。你的这个是T载体吗？以前TA克隆有问题吗？感受态有问题吗？你描述的也不清楚，中间很多环节都有可能有问题
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3楼2018-01-25 15:42:33
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转化对照做了吗？
抗生素？
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2018-01-23 03:07:12
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遊俠

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个加A体系。。合适吗？

发自小木虫Android客户端
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4楼2018-01-29 23:22:58
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Michael ~

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-01-23 03:07:12
转化对照做了吗？
抗生素？

转化对照没做，抗生素会出什么问题么
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5楼2018-02-04 20:36:05
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