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qpdiao

银虫 (正式写手)

[交流] 梯度洗脱时,液相出现莫名奇妙的峰,怎么办?

我们做的是液相分析蛋白及多肽,采用梯度洗脱,A是0.1%的三氟乙酸水溶液,B是0.085%的三氟乙酸乙腈溶液,流速0.2mL/min,色谱柱为C18,孔径为300A。梯度为0-60min,A由0%-50%,60-100min,A由50%-100%。结果在走空白的时候,在10分钟以后就出现一系列的色谱峰,附上色谱图,谢谢了!(是不是梯度洗脱的问题,请高手指教)
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chgli1981

铁杆木虫 (著名写手)


qpdiao(金币+1):谢谢参与
在梯度洗脱中这是正常现象,你想办法调节一下梯度变化使空白峰对样品无干扰就行
2楼2009-03-04 16:39:14
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qpdiao

银虫 (正式写手)

谢谢chgli1981 ,我们的空白峰非常多,不知道是不是正常现象。我们做的是多肽复杂混合物,所以样品峰应该挺多,不好调节空白峰对样品无干扰。有没有什么办法能够让空白峰不出现,用的人说可以用预混合,不知道可不可行?
3楼2009-03-04 16:50:26
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j115090587

金虫 (正式写手)

空白是什么组分啊。这么多峰
4楼2009-03-05 10:38:52
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嘉木

金虫 (正式写手)

★ ★
佳怡(金币+2,VIP+0):感谢应助 3-7 08:49
我一般也是用TFA和乙腈做梯度洗脱,但是从来没有出现过这么多空白峰。
尤其是61min左右的那个峰,太高了,你看看是不是六通阀被污染了
5楼2009-03-05 13:26:44
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qpdiao

银虫 (正式写手)


佳怡(金币+1,VIP+0):鼓励交流 3-7 08:49
这些天来,我们一直在冲洗色谱柱和进样阀,结果还是这样。现在我们主要怀疑两点,1是色谱柱污染了,杂质不断的被冲洗出来,2是流动相梯度洗脱引起的信号波动。回j115090587 ,空白里什么都没有,什么样品都没进。问嘉木 ,你做TFA和乙腈做梯度洗脱的时候,存不存在基线波动,鬼峰多吗?
6楼2009-03-05 16:40:17
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嘉木

金虫 (正式写手)

作梯度洗脱的时候是有基线波动,但是像你发的这么大的没有
7楼2009-03-05 18:30:40
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嘉木

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
佳怡(金币+3,VIP+0)::) 3-7 08:49
刚才忽然想起,LZ你的检测波长是多少?
在220nm下和254nm下的检测结果是完全不同的!
请LZ告诉我你的检测波长,我在自己的机子上试试
8楼2009-03-05 19:57:09
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纯净水5256

至尊木虫 (著名写手)


同一位置,反复出现这种情况,很可能是柱子污染了。

应该更换捕集柱。
9楼2009-03-05 21:05:53
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qpdiao

银虫 (正式写手)

嘉木,检测波长时210nm.
10楼2009-03-06 07:47:16
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