24小时热门版块排行榜    

查看: 2490  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

吐司布丁7

新虫 (初入文坛)

[求助] 分子生物学、蛋白表达 已有3人参与

求助各位大神,最近用BL21表达pET系列重组质粒,用溶菌酶破碎细菌,但是离心之后,SDS-PAGE电泳结果显示上清没有蛋白条带,沉淀里有,课题组的师兄师姐的又没有问题,这是什么情况啊?感谢各位的指点
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
6楼2018-01-12 21:53:00
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
查看全部 14 个回答

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
2楼2018-01-12 17:30:44
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-02-22 08:15:21
你反应的条件是啥,LB?还是M9?还是别的,温度,诱导条件(IPTG浓度,诱导时间)每个样本都可能不一样,要具体看,如果是30度培养诱导3小时,可以降低到16到18度,诱导24小时,还有IPTG浓度,从高到低0.6-0.1等,除了这些,培养基也有好些种,每种也不一样。此外,BL21之外还可以用其他的菌株(Rosetta 2),本身DH5a也可以试一试。如果不行,再换载体,pET15,21,28等等。总之,需要条件摸索
3楼2018-01-12 18:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吐司布丁7

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 18840843935 at 2018-01-12 17:30:44
改变诱导条件试试,就是优化一下条件,诱导剂浓度低一点,温度低一点什么的,目的是慢慢的表达,然后好有时间折叠表达出可溶蛋白

诱导条件是:IPTG的终浓度0.1mM,16℃、120rpm,14-16h。
主要是上清几乎没有任何条带,这个跟蛋白表达的诱导条件关系大吗?就算我的目的蛋白没有表达,也应该有一些菌体自身的蛋白条带才对吧?
4楼2018-01-12 20:35:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见