24小时热门版块排行榜    

查看: 2470  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

吐司布丁7

新虫 (初入文坛)

[求助] 分子生物学、蛋白表达 已有3人参与

求助各位大神,最近用BL21表达pET系列重组质粒,用溶菌酶破碎细菌,但是离心之后,SDS-PAGE电泳结果显示上清没有蛋白条带,沉淀里有,课题组的师兄师姐的又没有问题,这是什么情况啊?感谢各位的指点
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吐司布丁7

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ksws0465326 at 2018-01-12 18:10:05
你反应的条件是啥,LB?还是M9?还是别的,温度,诱导条件(IPTG浓度,诱导时间)每个样本都可能不一样,要具体看,如果是30度培养诱导3小时,可以降低到16到18度,诱导24小时,还有IPTG浓度,从高到低0.6-0.1等,除 ...

用的LB培养基,诱导条件是:0.1mM的IPTG,16℃,140rpm,14-16h,现在纠结的问题是,就算我的目的蛋白没有表达,那菌体本身的蛋白应该会有表达吧?拿沉淀来电泳验证了是包涵体表达,就是很不能理解,为什么上清没有条带,我加入的溶菌酶的量有点高,这个会不会有影响?
5楼2018-01-12 20:41:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
2楼2018-01-12 17:30:44
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-02-22 08:15:21
你反应的条件是啥,LB?还是M9?还是别的,温度,诱导条件(IPTG浓度,诱导时间)每个样本都可能不一样,要具体看,如果是30度培养诱导3小时,可以降低到16到18度,诱导24小时,还有IPTG浓度,从高到低0.6-0.1等,除了这些,培养基也有好些种,每种也不一样。此外,BL21之外还可以用其他的菌株(Rosetta 2),本身DH5a也可以试一试。如果不行,再换载体,pET15,21,28等等。总之,需要条件摸索
3楼2018-01-12 18:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吐司布丁7

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 18840843935 at 2018-01-12 17:30:44
改变诱导条件试试,就是优化一下条件,诱导剂浓度低一点,温度低一点什么的,目的是慢慢的表达,然后好有时间折叠表达出可溶蛋白

诱导条件是:IPTG的终浓度0.1mM,16℃、120rpm,14-16h。
主要是上清几乎没有任何条带,这个跟蛋白表达的诱导条件关系大吗?就算我的目的蛋白没有表达,也应该有一些菌体自身的蛋白条带才对吧?
4楼2018-01-12 20:35:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 不应该看fileCode +6 且听虎啸 2026-08-12 8/400 2026-08-13 12:07 by 小木虫6752397
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 26/1300 2026-08-13 12:01 by Tide man
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +9 瞬息宇宙 2026-08-12 9/450 2026-08-13 10:12 by Vivilian
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
信息提示
请填处理意见