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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[交流] 关于定量PCR一个奇怪的想法 已有4人参与

大家一致的操作是,提取总RNA,然后测浓度,定量2000ng,然后反转录cDNA。

但是这样做可以么?提取总RNA,不定量直接吸点反转录cDNA,然后测cDNA浓度,然后定量。

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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)


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不可以,因为反转录时要加dNTP,dNTP的浓度非常高,你反转录再测基本上是dNTP的浓度而不是cDNA的浓度了。
2楼2018-01-10 17:49:16
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SEXUS

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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3楼2018-01-10 23:47:30
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2018-01-10 06:49:16
不可以,因为反转录时要加dNTP,dNTP的浓度非常高,你反转录再测基本上是dNTP的浓度而不是cDNA的浓度了。

原来如此!

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4楼2018-01-11 00:10:09
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didongwei

金虫 (著名写手)


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不可以,反转录后的产物组成复杂,无法做到准确的空白对照,测定结果没有意义

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不是优秀,而是不可替代
5楼2018-01-11 00:14:13
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Nec99

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
为什么要定量到2000 500是不是有点低

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6楼2018-01-15 16:33:57
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