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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 500ml M9培养基培养大肠杆菌，菌液变的偏绿，有酸臭味，OD600很难达到1
汕头大学海洋科学接受调剂
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小花龙牙草

新虫 (初入文坛)

[求助] 500ml M9培养基培养大肠杆菌，菌液变的偏绿，有酸臭味，OD600很难达到1 已有1人参与

最近用M9培养基培养Rosetta（DE3）菌种，先用5mlLB复苏冻存的甘油菌，复苏完在转到50ml M9中培养过夜，这一步是能长起来的，但是菌液已经开始有点偏绿酸臭了。再将这50ml的菌液转到大瓶M9中培养，摇了20多个小时，OD600才长到0.6，菌液也变得比较绿酸臭了。

以前也做过M9表达是正常的，搬到新实验室就做不出来了，不知道是为什么。求助
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1楼 2018-01-02 11:20:24
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xiecj

木虫 (著名写手)
为啥我在m9中长的细菌基本上只能到0.2？

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2楼2018-01-02 13:55:09
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小花龙牙草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiecj at 2018-01-02 13:55:09
为啥我在m9中长的细菌基本上只能到0.2？

啊？一般大肠杆菌在M9可以长的，只是比LB中长的慢一些。我以前做的，一般大约10个小时就能长到1.0了。如果想让菌长的快一些，可以加一点LB。

那你的长到0.2能用于表达蛋白吗？
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3楼2018-01-02 14:50:21
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xiecj

木虫 (著名写手)
不是，我的大肠在LB中长的很欢乐，但是M9中几乎不怎么长，对了这个细菌的品系是pbr322

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4楼2018-01-02 14:51:37
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小花龙牙草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiecj at 2018-01-02 14:51:37
不是，我的大肠在LB中长的很欢乐，但是M9中几乎不怎么长，对了这个细菌的品系是pbr322

那是不是这个品系有啥基因缺陷，然后培养基里又缺少某种特定的营养，就长不起来了啊？我也不是很懂
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5楼2018-01-02 15:01:23
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xiecj

木虫 (著名写手)
我的M9是买的，当时一直长不起来，我问技术也是说培养基长的很好，很奇怪

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6楼2018-01-02 15:11:45
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skull123

木虫 (正式写手)
★ ★
snoopytbw: 金币+2, 略有帮助 2018-01-04 14:15:22
我觉得第一步复苏后至少要用平皿接下菌，看看是不是纯的，确保是纯的在到50ml扩大培养，种子液都不做纯粹检测就扩大培养是很不靠谱的一件事情
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7楼2018-01-02 16:07:24
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小花龙牙草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by skull123 at 2018-01-02 16:07:24
我觉得第一步复苏后至少要用平皿接下菌，看看是不是纯的，确保是纯的在到50ml扩大培养，种子液都不做纯粹检测就扩大培养是很不靠谱的一件事情

因为我在用M9前，先用大瓶LB摇是正常表达的，然后再做M9的就不正常了，所以就没想到菌可能有问题。之前一直以为是不是培养基灭菌没灭干净，或者是BME有问题

我涂个板看看，谢谢帮助。
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8楼2018-01-02 16:34:49
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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4楼: Originally posted by xiecj at 2018-01-02 14:51:37
不是，我的大肠在LB中长的很欢乐，但是M9中几乎不怎么长，对了这个细菌的品系是pbr322

Pbr322的在M9上是完全可以长得，10个小时OD到1没有问题，变绿变臭怀疑是你菌种不纯，有杂菌，可以分纯一下
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···
9楼2018-01-04 11:30:23
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xiecj

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 小冀- at 2018-01-04 11:30:23
Pbr322的在M9上是完全可以长得，10个小时OD到1没有问题，变绿变臭怀疑是你菌种不纯，有杂菌，可以分纯一下...

摇床培养的，条件是哪些？能细说一下不

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10楼2018-01-04 11:31:29
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