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小花龙牙草

新虫 (初入文坛)

[求助] 500ml M9培养基培养大肠杆菌,菌液变的偏绿,有酸臭味,OD600很难达到1 已有1人参与

最近用M9培养基培养Rosetta(DE3)菌种,先用5mlLB复苏冻存的甘油菌,复苏完在转到50ml M9中培养过夜,这一步是能长起来的,但是菌液已经开始有点偏绿酸臭了。再将这50ml的菌液转到大瓶M9中培养,摇了20多个小时,OD600才长到0.6,菌液也变得比较绿酸臭了。

以前也做过M9表达是正常的,搬到新实验室就做不出来了,不知道是为什么。求助
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xiecj

木虫 (著名写手)

为啥我在m9中长的细菌基本上只能到0.2?

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2楼2018-01-02 13:55:09
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小花龙牙草

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiecj at 2018-01-02 13:55:09
为啥我在m9中长的细菌基本上只能到0.2?

啊?一般大肠杆菌在M9可以长的,只是比LB中长的慢一些。我以前做的,一般大约10个小时就能长到1.0了。如果想让菌长的快一些,可以加一点LB。

那你的长到0.2能用于表达蛋白吗?
3楼2018-01-02 14:50:21
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xiecj

木虫 (著名写手)

不是,我的大肠在LB中长的很欢乐,但是M9中几乎不怎么长,对了这个细菌的品系是pbr322

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4楼2018-01-02 14:51:37
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小花龙牙草

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xiecj at 2018-01-02 14:51:37
不是,我的大肠在LB中长的很欢乐,但是M9中几乎不怎么长,对了这个细菌的品系是pbr322

那是不是这个品系有啥基因缺陷,然后培养基里又缺少某种特定的营养,就长不起来了啊?我也不是很懂
5楼2018-01-02 15:01:23
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xiecj

木虫 (著名写手)

我的M9是买的,当时一直长不起来,我问技术也是说培养基长的很好,很奇怪

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6楼2018-01-02 15:11:45
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skull123

木虫 (正式写手)

★ ★
snoopytbw: 金币+2, 略有帮助 2018-01-04 14:15:22
我觉得第一步复苏后至少要用平皿接下菌,看看是不是纯的,确保是纯的在到50ml扩大培养,种子液都不做纯粹检测就扩大培养是很不靠谱的一件事情
7楼2018-01-02 16:07:24
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小花龙牙草

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by skull123 at 2018-01-02 16:07:24
我觉得第一步复苏后至少要用平皿接下菌,看看是不是纯的,确保是纯的在到50ml扩大培养,种子液都不做纯粹检测就扩大培养是很不靠谱的一件事情

因为我在用M9前,先用大瓶LB摇是正常表达的,然后再做M9的就不正常了,所以就没想到菌可能有问题。之前一直以为是不是培养基灭菌没灭干净,或者是BME有问题

我涂个板看看,谢谢帮助。
8楼2018-01-02 16:34:49
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小冀-

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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4楼: Originally posted by xiecj at 2018-01-02 14:51:37
不是,我的大肠在LB中长的很欢乐,但是M9中几乎不怎么长,对了这个细菌的品系是pbr322

Pbr322的在M9上是完全可以长得,10个小时OD到1没有问题,变绿变臭怀疑是你菌种不纯,有杂菌,可以分纯一下
···
9楼2018-01-04 11:30:23
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xiecj

木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 小冀- at 2018-01-04 11:30:23
Pbr322的在M9上是完全可以长得,10个小时OD到1没有问题,变绿变臭怀疑是你菌种不纯,有杂菌,可以分纯一下...

摇床培养的,条件是哪些?能细说一下不

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10楼2018-01-04 11:31:29
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