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实验室410

金虫 (正式写手)

[求助] G418筛选稳定细胞系

本人最近正在筛选稳定细胞系,是neo抗性的,在293FT、KP、LCL细胞中筛选,G418浓度多少合适?我第一次是400、800、1200ug/mL,3天没有死亡;第二次是1500、2000、2500ug/mL,第二天还是没有明显死亡。大家都有什么经验,探讨一下。
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像打不死的小强一样努力奋斗
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实验室410

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by memorize1991 at 2017-12-28 14:35:56
G418我就用的1x PBS配的,密度的话,我是在24孔板中做的  浓度梯度,种2万个细胞每孔。一天后就开始了加G418。 现在都是带puro的载体,所以都用puro筛,一段时间后过流式细胞仪。既然没把你细胞筛下去,也许是你一 ...

设有空白对照,就是没有转染病毒的,也没有出现明显死亡。应该是G418的问题。
像打不死的小强一样努力奋斗
7楼2017-12-28 15:45:38
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memorize1991

木虫 (正式写手)

我用G418筛的时候1mg/ml就够了,不过后来重建的稳转系用的puro。筛选浓度和你用的载体还有细胞有关吧,你可以查一下,我记得查过有书上给过G418在不同细胞中筛选浓度的大概范围。你这么高的浓度都不死有点儿不正常,可以等2天再看看~是否可能你的G418配的有问题?

发自小木虫Android客户端
2楼2017-12-28 12:35:48
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实验室410

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by memorize1991 at 2017-12-28 12:35:48
我用G418筛的时候1mg/ml就够了,不过后来重建的稳转系用的puro。筛选浓度和你用的载体还有细胞有关吧,你可以查一下,我记得查过有书上给过G418在不同细胞中筛选浓度的大概范围。你这么高的浓度都不死有点儿不正常, ...

那一般情况几天会出现大量死亡呢?G418是用一半的生理盐水,一半的100mM的HEPES配置的,有问题吗?
像打不死的小强一样努力奋斗
3楼2017-12-28 13:11:01
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实验室410

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by memorize1991 at 2017-12-28 12:35:48
我用G418筛的时候1mg/ml就够了,不过后来重建的稳转系用的puro。筛选浓度和你用的载体还有细胞有关吧,你可以查一下,我记得查过有书上给过G418在不同细胞中筛选浓度的大概范围。你这么高的浓度都不死有点儿不正常, ...

还有细胞浓度有影响吗?
像打不死的小强一样努力奋斗
4楼2017-12-28 13:12:17
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