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实验室410金虫 (正式写手)
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G418筛选稳定细胞系
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| 本人最近正在筛选稳定细胞系，是neo抗性的，在293FT、KP、LCL细胞中筛选，G418浓度多少合适？我第一次是400、800、1200ug/mL，3天没有死亡；第二次是1500、2000、2500ug/mL，第二天还是没有明显死亡。大家都有什么经验，探讨一下。 |
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memorize1991
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G418我就用的1x PBS配的，密度的话，我是在24孔板中做的 浓度梯度，种2万个细胞每孔。一天后就开始了加G418。 现在都是带puro的载体，所以都用puro筛，一段时间后过流式细胞仪。既然没把你细胞筛下去，也许是你一转染效率高，死亡细胞少，你可以提个基因组检测一下你的基因插入进去没～～也可以做个QRT看看表达量～～试一试，不一定是你的筛选药物的问题。 例如我一种普通的细胞，在puro浓度为1.5ug/ml puro筛选，但我转染的细胞用3ug的筛选～～你得先预实验确定一下合适的筛选浓度～ 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-12-28 14:35:56
memorize1991
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我用G418筛的时候1mg/ml就够了，不过后来重建的稳转系用的puro。筛选浓度和你用的载体还有细胞有关吧，你可以查一下，我记得查过有书上给过G418在不同细胞中筛选浓度的大概范围。你这么高的浓度都不死有点儿不正常，可以等2天再看看～是否可能你的G418配的有问题？ 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-12-28 12:35:48
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3楼2017-12-28 13:11:01
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4楼2017-12-28 13:12:17
