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longfeng

金虫 (小有名气)

[交流] 求助:提质粒为什么总是出现好几条带

各位大侠,我最近提质粒总是跑出两三条带,应该是螺旋和超螺旋条带。但是影响酶切,影响酶切检测。
请问怎么解决这个问题?不知各位大侠有没有好的解决方案?
谢谢!
xueshui0393@126.com
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lufuhao

木虫 (著名写手)

极品木虫

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):感谢应助!加油! 5-27 16:15
那可以这样试一下
1。把你的感受态与转化的感受态分别涂板,这样看一下你的感受态又没有问题!
2。如果不是用的试剂盒,那看一下你的操作方法有没有错误,或者,干脆,让你做过此实验的同学帮帮忙,帮你提一下,再看看效果!(我小抽质粒时,加Solution II后是要很小心的,还有最好不要直接用枪头特别是小枪头吹吸质粒溶液,弹匀即可)
3。我不知道你所说的两三条带是什么样子?最好把图贴上来,一般如果是螺旋、线性或开环的话,我是说在一般情况下,一般只有一条带比较亮而且为之相对比较集中
4。酶切。确定酶切体系没有错误的前提下,用只有一个酶切为点的单酶切,跑电泳看一下,一般应该只出现一条带,否则,要仔细考虑考虑另外一条带是怎么来的!
将心比心
4楼2009-03-02 11:06:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

酶切后就剩一条了,除非切开的片段很大……怎么会影响酶切………………
2楼2009-03-01 21:20:25
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

提的质粒一般都会有2-3条带,DNA没有变化,只是状态有所不同,酶切后都是一样的,不会影响酶切的
5楼2009-03-02 11:18:26
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longfeng

金虫 (小有名气)

提质粒的时候出现两三条条带可能由于摇晃的力度太大,会出现超螺旋、螺旋和开环三种状态的,不过不会太影响酶切效果,建议你在做酶切之前先把质粒变性一下,这样会比较好。
6楼2009-05-27 16:00:15
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