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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：提质粒为什么总是出现好几条带
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longfeng

金虫 (小有名气)

[交流] 求助：提质粒为什么总是出现好几条带

各位大侠，我最近提质粒总是跑出两三条带，应该是螺旋和超螺旋条带。但是影响酶切，影响酶切检测。
请问怎么解决这个问题？不知各位大侠有没有好的解决方案？
谢谢！
xueshui0393@126.com
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1楼 2009-03-01 19:56:28
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
酶切后就剩一条了，除非切开的片段很大……怎么会影响酶切………………
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2楼2009-03-01 21:20:25
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
不不影响酶切
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会当凌绝顶，一览众山小
3楼2009-03-02 03:29:45
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lufuhao

木虫 (著名写手)

极品木虫
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):感谢应助！加油！ 5-27 16:15
那可以这样试一下
1。把你的感受态与转化的感受态分别涂板，这样看一下你的感受态又没有问题！
2。如果不是用的试剂盒，那看一下你的操作方法有没有错误，或者，干脆，让你做过此实验的同学帮帮忙，帮你提一下，再看看效果！（我小抽质粒时，加Solution II后是要很小心的，还有最好不要直接用枪头特别是小枪头吹吸质粒溶液，弹匀即可）
3。我不知道你所说的两三条带是什么样子？最好把图贴上来，一般如果是螺旋、线性或开环的话，我是说在一般情况下，一般只有一条带比较亮而且为之相对比较集中
4。酶切。确定酶切体系没有错误的前提下，用只有一个酶切为点的单酶切，跑电泳看一下，一般应该只出现一条带，否则，要仔细考虑考虑另外一条带是怎么来的！
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将心比心
4楼2009-03-02 11:06:19
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
提的质粒一般都会有2-3条带,DNA没有变化,只是状态有所不同,酶切后都是一样的,不会影响酶切的
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5楼2009-03-02 11:18:26
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longfeng

金虫 (小有名气)
提质粒的时候出现两三条条带可能由于摇晃的力度太大，会出现超螺旋、螺旋和开环三种状态的，不过不会太影响酶切效果，建议你在做酶切之前先把质粒变性一下，这样会比较好。
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6楼2009-05-27 16:00:15
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 小猫三两只 at 2009-3-2 11:18:
提的质粒一般都会有2-3条带,DNA没有变化,只是状态有所不同,酶切后都是一样的,不会影响酶切的

同意这只猫的说法。
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7楼2009-05-27 16:16:28
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longxiange520

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提质粒2-3条带很正常的啊，我有次提取的只有一条带被老板怀疑是不是提质粒的过程中出现什么问题了呢！
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8楼2009-05-27 16:30:11
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suenmomo

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切完全的话不应该的
除非两条带的分子量相差太大
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9楼2009-05-27 16:59:19
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沐风望野

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提出两三条带一般都是很正常的，不过注意在加入溶液2和3之后的混匀力度可以稍微改善这个情况，也可以使目的质粒的亮度增加
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10楼2009-05-27 18:54:26
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