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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请教大神，两种细菌共培养如何定量每种菌？
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294005977

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教大神，两种细菌共培养如何定量每种菌？ 已有4人参与

想做两种菌的互作。打算液体共培养，但不知道如何测共培养过程中两种菌各自的生物量。

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1楼 2017-12-20 13:41:22
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snoopytbw

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感谢参与，应助指数 +1
共培养通常用的是overlay。液体培养不太好做啊，构建GFP的话，很可能会改变菌株的性状，我建议是用FISH，荧光探针法。或者简单点，直接qPCR，定量分析，记得要加2组内参
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3楼2017-12-21 08:51:44
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465663473

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
294005977(小冀-代发): 金币+2, 简单 2017-12-27 09:16:24
不知道题主做的具体哪两种菌。如果培养菌落好区分，可以稀释涂布平板计数。如果菌落不好区分，可以尝试下选择培养基计数 。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2017-12-21 17:00:16
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duanxke2014

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是常用的细菌，例如E.coli S. aureus或Bacillus 这些有遗传操作的菌还是环境中分离的菌？如果是常用菌，可以构建荧光蛋白，通过对荧光量进行定量分析。如果是环境分离的菌，可以用半透膜将两种菌隔离，使其能够感应对方存在，而不会混合。
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2楼2017-12-21 05:29:05
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果不同的菌，直接分析混菌中16SRNA占比就好了吧，就像宏基因组那样~如果是相同菌经过改造之后混菌的话，就比较麻烦了，得找特应性的特征~
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···
4楼2017-12-21 14:15:37
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snoopytbw

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11楼: Originally posted by mircoakk at 2017-12-27 00:15:20
如果用内参的话，肯定是mRNA水平。关键是，为啥用毒力基因？我是想看两个菌的共生作用呢，如果是这样的话，应该怎么挑选目的基因呢
...

某些毒力基因具有菌种特异性。共生的话，肯定也会有代谢上的特异性酶，以此作为目的基因即可啊。查文献吧
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13楼2017-12-27 14:54:52
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keyangbin

铜虫 (小有名气)
可以先将这两种菌各平均分成2个等份，提供四份平行的液体培养基，将四分菌放入四分培养基中，培养一代后，将其中的两份合并，然后定期测三种菌的OD值，间接测定。
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6楼2017-12-23 14:51:43
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294005977

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by keyangbin at 2017-12-23 14:51:43
可以先将这两种菌各平均分成2个等份，提供四份平行的液体培养基，将四分菌放入四分培养基中，培养一代后，将其中的两份合并，然后定期测三种菌的OD值，间接测定。

间接测定，两个菌之间有相互作用的话。不是就不准了吗

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7楼2017-12-25 16:16:43
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mircoakk

新虫 (初入文坛)
我也想做。想问楼主用了什么方法？

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8楼2017-12-26 14:04:15
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mircoakk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-12-21 08:51:44
共培养通常用的是overlay。液体培养不太好做啊，构建GFP的话，很可能会改变菌株的性状，我建议是用FISH，荧光探针法。或者简单点，直接qPCR，定量分析，记得要加2组内参

想问一下，做qPCR的话，是直接用DNA还是反转录成cDA呢？目的基因应该怎么选择呢？内参的目的是什么？求大神指点

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9楼2017-12-26 14:12:42
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snoopytbw

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9楼: Originally posted by mircoakk at 2017-12-26 14:12:42
想问一下，做qPCR的话，是直接用DNA还是反转录成cDA呢？目的基因应该怎么选择呢？内参的目的是什么？求大神指点
...

都是DNA还怎么反转录呀。。。目的基因选择的话，选特异性基因，通常都是选的特征性的毒力基因，内参通常用16s等
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10楼2017-12-26 16:33:09
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