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MeiPD

新虫 (小有名气)


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酵母重组蛋白纯化问题
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用酵母做重组,表达融合蛋白约9.7K,属于分泌型表达,含His-tag,取上清10倍浓缩后进行Tri-sds-page电泳跑胶,出现目地条带,且看起来表达量还可以。上清10ml用PBS透析后上Ni柱,跑胶,结果穿透液,洗涤液(咪唑10mM)和洗脱液(咪唑250mM)均没有目地蛋白,后来在样品和洗涤,洗脱液中加了4M尿素,跑胶发现在穿透液,洗涤液中隐约出现了目地蛋白条带,但量很低,这样应该怎么调整纯化条件呢?

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