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就是柚子啊!

新虫 (正式写手)

[求助] 前辈们,这个情况遇到过么? 已有2人参与

从提质粒,反转录,pcr,连T,转化,涂板,挑菌,菌落pcr,摇菌,提质粒,每个过程都有条带,也都在目的条带区域。提质粒测序回来,却没有目的条带,非常非常不解,而且做了两次,都没有目的物,两个多月,一点成就都没有!跪求大神帮分析

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arthrospira

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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质粒测序前做了简单的验证吗?比如酶切,是否有目标条带?
2楼2017-12-15 09:26:27
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就是柚子啊!

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by arthrospira at 2017-12-15 09:26:27
质粒测序前做了简单的验证吗?比如酶切,是否有目标条带?

我们是这样,先去质粒测序,回来看看有没有目的序列,有的话就酶切,没有的话就重做。我就是第一次测序结果没有目的序列,然后又做这次,又没有。所以真心不知道哪有问题

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3楼2017-12-15 09:52:45
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长岛冰茶yo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是目的条带根本就不在质粒上呢
4楼2017-12-15 10:01:14
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就是柚子啊!

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 长岛冰茶yo at 2017-12-15 10:01:14
可能是目的条带根本就不在质粒上呢

对√测序结果就是这样的。难道是连T没连上?转化后都是有菌落,菌落pcr也是有条带的啊!!!

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5楼2017-12-15 10:27:09
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含笑少年。

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-12-16 09:57:18
先酶切,确定连进去了再测序。另外,如果你的片段比较长,建议连接的时候用pcr仪控温,16度过夜连接。

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6楼2017-12-15 10:51:23
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cosmos796

禁虫 (职业作家)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-12-16 09:59:18
本帖内容被屏蔽

7楼2017-12-15 12:29:29
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arthrospira

金虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-12-16 09:59:36
引用回帖:
3楼: Originally posted by 就是柚子啊! at 2017-12-15 09:52:45
我们是这样,先去质粒测序,回来看看有没有目的序列,有的话就酶切,没有的话就重做。我就是第一次测序结果没有目的序列,然后又做这次,又没有。所以真心不知道哪有问题
...

感觉这么做程序不对,测序可能当天不能知道结果,等待的时间长,还要花钱测序;直接酶切,跑个胶就能看结果。
8楼2017-12-15 13:25:58
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arthrospira

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

实际上每一步实验结果都要验证,确认成功才做下一步。像楼主这样做实验程序是不对的。
9楼2017-12-15 13:29:51
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就是柚子啊!

新虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by arthrospira at 2017-12-15 13:29:51
实际上每一步实验结果都要验证,确认成功才做下一步。像楼主这样做实验程序是不对的。

我不知道你说的验证是指什么!每一步我都跑胶检测了!结果也都在意料之内!

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10楼2017-12-15 13:40:50
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