[交流] 有关酵母单杂交验证试验操作相关问题！ 已有2人参与

之前大半年都在单杂筛库，现在得到了几个基因，然后克隆出来做点对点的验证。 有几点问题，将基因AD载体和诱饵载体共转之后是涂在SD/-Leu还是SD/-Ura-Leu平板上呢？个人感觉都差不多，平板上是否要加AbA？ 以及后面的挑选阳性克隆是用两对引物检测吗？（启动子和基因） 点斑的时候我看到有的是①用YPDA摇菌，OD有要求吗？然后稀释10、100、1000、10000倍进行点斑，用YPDA稀释还是ddH2O？ 这种稀释点斑的意义是啥？ ②有的点斑是直接挑阳性克隆用0.9%NaCl调制OD=0.2 然后点斑 不知道哪一种比较靠谱或者有各自的优势？ PS最后问一下这种筛库出来的阳性率怎么样？有点担心假阳性的 毕竟课题就是做这个的，好不容易有点结果。

回复此楼