| 查看: 652 | 回复: 8 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
大家帮忙想想酶切连接的办法！
|
|||
| 我现在想连一个3000的片段到7000的载体上，但是载体可用的酶切位点只有EcoRI。将载体单酶切后去磷酸化，再与酶切的片段连接。载体：片段（1：5）。但做了几轮都为自连。大家想想有什么更好的办法吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
考研调剂
已经有7人回复
-
0856调剂
已经有4人回复
-
材料277求调剂
已经有5人回复
-
一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂
已经有6人回复
-
资源与环境 调剂申请(333分)
已经有8人回复
-
334分 一志愿武理 材料求调剂
已经有3人回复
-
284求调剂
已经有5人回复
-
0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可
已经有6人回复
-
北科281学硕材料求调剂
已经有18人回复
-
275求调剂
已经有9人回复
2楼2009-02-27 18:02:51
chemifunan
木虫 (正式写手)
海王小木虫
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2816.9
- 帖子: 393
- 在线: 11.4小时
- 虫号: 235785
- 注册: 2006-04-01
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
★ ★ ★
sxdxrhyy(金币+3,VIP+0):谢谢参与，欢迎常来！ 3-1 10:03
sxdxrhyy(金币+3,VIP+0):谢谢参与，欢迎常来！ 3-1 10:03
|
去磷酸化一步做的不彻底 去磷酸的步骤是切好的载体切胶回收 加入碱性磷酸酶 SAP或CIAP都行 水浴15min 然后补加一次酶再水浴15min 注意一定要失活掉去磷的酶 SAP70度加热就可以了 然后加盐 异丙醇沉淀-80度 70乙醇洗洗 抽干OK CIAP最好酚仿抽 然后加盐沉淀 然后后面操作一样 载体少加点 1：5也可以了 你是什么载体 蓝白斑能用吗？ Xgal用LB稀释一下 增大体积减小误差容易涂匀 涂在AgarLB上 这样增加一些效率 我没有去过磷的也做过 运气好 挑到过了 一般去磷是可以连上的 |
3楼2009-02-27 19:47:10
4楼2009-02-28 11:07:00
chemifunan
木虫 (正式写手)
海王小木虫
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2816.9
- 帖子: 393
- 在线: 11.4小时
- 虫号: 235785
- 注册: 2006-04-01
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
5楼2009-02-28 19:10:54
6楼2009-02-28 22:54:51
chemifunan
木虫 (正式写手)
海王小木虫
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2816.9
- 帖子: 393
- 在线: 11.4小时
- 虫号: 235785
- 注册: 2006-04-01
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
7楼2009-03-01 17:37:22
8楼2009-03-02 12:37:58
36678293
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1453.5
- 散金: 52
- 红花: 3
- 帖子: 426
- 在线: 128小时
- 虫号: 650724
- 注册: 2008-11-10
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2009-03-04 00:30:52
