| 查看: 867 | 回复: 8 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
大家帮忙想想酶切连接的办法！
|
|||
| 我现在想连一个3000的片段到7000的载体上，但是载体可用的酶切位点只有EcoRI。将载体单酶切后去磷酸化，再与酶切的片段连接。载体：片段（1：5）。但做了几轮都为自连。大家想想有什么更好的办法吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
6楼2009-02-28 22:54:51
2楼2009-02-27 18:02:51
chemifunan
木虫 (正式写手)
海王小木虫
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2816.9
- 帖子: 393
- 在线: 11.4小时
- 虫号: 235785
- 注册: 2006-04-01
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
★ ★ ★
sxdxrhyy(金币+3,VIP+0):谢谢参与，欢迎常来！ 3-1 10:03
sxdxrhyy(金币+3,VIP+0):谢谢参与，欢迎常来！ 3-1 10:03
|
去磷酸化一步做的不彻底 去磷酸的步骤是切好的载体切胶回收 加入碱性磷酸酶 SAP或CIAP都行 水浴15min 然后补加一次酶再水浴15min 注意一定要失活掉去磷的酶 SAP70度加热就可以了 然后加盐 异丙醇沉淀-80度 70乙醇洗洗 抽干OK CIAP最好酚仿抽 然后加盐沉淀 然后后面操作一样 载体少加点 1：5也可以了 你是什么载体 蓝白斑能用吗？ Xgal用LB稀释一下 增大体积减小误差容易涂匀 涂在AgarLB上 这样增加一些效率 我没有去过磷的也做过 运气好 挑到过了 一般去磷是可以连上的 |
3楼2009-02-27 19:47:10
4楼2009-02-28 11:07:00
