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关于western blotting
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最近一直在做WB实验，内参的量始终控制不一，也测了蛋白浓度，目的蛋白跑的条带也很不好。见下图 该图是目的蛋白WB结果，很不理想，不知道为什么会是这样，还望Western大神给予指导。 样品前处理： 1、获得诱导表达的菌液（宿主菌是BL21(DE3)，目的蛋白是人源的） 2、离心，去上清，ddH2O悬浮、涡旋、离心、去上清，加适量的ddH2O悬浮菌体 3、加PMSF（终浓度为1mM）超声破碎20min，工作4s、间隙5s 4、测蛋白总浓度，根据BCA蛋白浓度计算公式计算蛋白浓度 5、吸取相同量的样品，用ddH2O补足至相同的体积，加3*blue loading buffer 6、沸水煮5min，煮好立马冰上冷却 7、上样跑胶 ，，，，，，， ，，，，，，， ，，，，，，， 哪位WB大神给看一下，有什么不对的地方吗？麻烦给予指导，万分感谢。  爱奇艺20171211161543.png |
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