| 查看: 3982 | 回复: 0 | |||
[交流]
关于western blotting
|
|
最近一直在做WB实验，内参的量始终控制不一，也测了蛋白浓度，目的蛋白跑的条带也很不好。见下图 该图是目的蛋白WB结果，很不理想，不知道为什么会是这样，还望Western大神给予指导。 样品前处理： 1、获得诱导表达的菌液（宿主菌是BL21(DE3)，目的蛋白是人源的） 2、离心，去上清，ddH2O悬浮、涡旋、离心、去上清，加适量的ddH2O悬浮菌体 3、加PMSF（终浓度为1mM）超声破碎20min，工作4s、间隙5s 4、测蛋白总浓度，根据BCA蛋白浓度计算公式计算蛋白浓度 5、吸取相同量的样品，用ddH2O补足至相同的体积，加3*blue loading buffer 6、沸水煮5min，煮好立马冰上冷却 7、上样跑胶 ，，，，，，， ，，，，，，， ，，，，，，， 哪位WB大神给看一下，有什么不对的地方吗？麻烦给予指导，万分感谢。  爱奇艺20171211161543.png |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有150人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
