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crystal数字PCR如何实现的核酸绝对定量？
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crystal数字PCR技术是一种核酸分子的绝对定量技术，原理是将PCR反应体系分配到大量微小的反应器中，在每个微反应器中包含或不包含 1 个或多个拷贝的目标核酸分子 (DNA 模板) ，进行"单分子模板"PCR 扩增。扩增结束后，通过阳性反应单元(通过终点荧光信号判断)的数目和统计学方法计算原始样本中靶基因的拷贝数。工作流程包含4个主要环节，即样本DNA/RNA的PCR/RT-PCR反应预混、反应预混液的分散或分区、PCR扩增、荧光信号的采集与数据分析（如下图所示）。【1】 Crystal数字PCR将样本DNA分散到25000-30000万个微滴中，使每个微滴中包含或者不包含1个或多个拷贝的目标分子(DNA模板)，所有微滴以2D阵列的形式单层随机平铺在sapphire芯片中，进行PCR扩增，扩增结束后读取各个反应单元的阴性或阳性荧光信号并进行统计学的分析，就可以计算出原始样本的模板拷贝数。那么我们如何保证每个微滴中只有一个DNA分子呢？ 详情请查看附件。 |
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2017-12-11 09:47:54, 828.06 K
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