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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr扩增
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栩给给

新虫 (小有名气)

[求助] pcr扩增 已有2人参与

pcr扩增总是扩不出来，跑胶后没条带，请大神指教，什么原因，需要怎么修改。程序是按照说明书和引物调整的。目的基因的引物扩出来的条带应该在1000bp左右，但是没有扩出。

pcr扩增


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1楼 2017-12-07 10:39:47
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ghst110

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.先将模板去跑个胶鉴定一下是不是降解了，或者测一下浓度（推荐跑胶鉴定）
2.根据步骤1中的结果调整模板用量：模板浓度过高或者过低都不利于扩增，如果含有杂质也可能抑制PCR扩增，最好稀释到合适浓度
3.验证引物设计有木有问题
4.以上都没有问题的话，建议换用高一级别的聚合酶产品，性能更强的产品，可减少优化工作，基本保证必出
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*才随遇长，识以穷精*
2楼2017-12-07 16:19:44
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hua_geduo

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 模板问题，模板量多一点少一点没关系
2. 引物问题
3. 程序问题，不知道你说的说明书是什么说明书
由于看不到你具体的信息，所以对照这三方面取找原因吧
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3楼2017-12-07 16:40:20
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ml夜微凉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ghst110 at 2017-12-07 16:19:44
1.先将模板去跑个胶鉴定一下是不是降解了，或者测一下浓度（推荐跑胶鉴定）
2.根据步骤1中的结果调整模板用量：模板浓度过高或者过低都不利于扩增，如果含有杂质也可能抑制PCR扩增，最好稀释到合适浓度
3.验证引物 ...

你好，请问DND浓度对扩增结果影响大吗

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4楼2019-08-25 21:20:05
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