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Jameweike

银虫 (初入文坛)

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[交流] 悬赏30个金币设计一个实验

从蛋白质出发克隆这个蛋白质的编码基因,写出详细的实验步骤,各位大侠要是能提供可行详细的方案我愿意送其金币30个

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1楼 2009-02-26 15:17:20

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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

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二楼的比较对，这种实验是要自己去查文献和书来自己思考的，最好不要依赖别人，那样你自己学到的太少，而且会得到很多错误的经验。相应的教科书有很多，建议楼主先看看比较广泛介绍的书，在找具体相关领域的看。不要随便相信别人。
比如3楼说底物诱导表达，这个是基本上不可能实现的吧，你都不知道该蛋白质是什么有什么性质什么作用，怎么可能去诱导？
从生物体中直接提取某种天然蛋白的难度之大、复杂程度之高，没有具体实践很难明白。当然运气好除外。

我不是搞这个的，但是多少上课的时候听到过一些，多少给楼主说说吧，但是实际情况要实际分析，不能僵硬的去套模式。
1st 首先搞清楚你为什么去研究这个蛋白，这个蛋白相应的研究状况如何，它上下游的蛋白有哪些，有哪些蛋白与它相互作用，那些蛋白有可能调节它，它最可能参与的生物学过程。
2ed 参照你搜索到的资料的情况，上该物种的基因组数据库（多数的研究对象都有基因组数据库了）或者相近物种的数据库，查询该蛋白可能的相近蛋白的序列。BLAST你的目的蛋白（这里存在相似度高低的问题）。如果能找到最好，找到就可以直接PCR扩增，克隆表达。如果找不到，或者结果不能确定，那么转向第三步。
3rd 分离你的目的蛋白。这里方法很多，比如双向电泳、层析纯化、FISH实验等等。但是该过程是非常复杂的。分离出该蛋白后，可以打质谱测序，当然你只能拿到N端或者C端的小部分序列。那么走到这一步，如果难道的雪列是正确的，你已经是幸运儿了。
4th EST walking或者如2楼所讲RACE技术寻找或者测得全序列。这个我没有深入研究过，你要另请高人。到此，楼主的要求已经基本完成。剩下的就是鉴定该基因是否就是你的目的蛋白。这个也是一个满复杂的过程，因为视蛋白来源不同，验证方法太多，不好一一列举。
其实这应该是真正的研究开始，楼主要求的仅仅是对该蛋白研究的最初过程。
一点愚见，抛砖引玉，如有错误还要海涵。要想得到很详细的研究方案，还要楼主多查一查书和相关的文献。