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muchong5577

金虫 (正式写手)

[交流] 金币求技术

大家好，你们做过包涵体的可溶性表达吗？能否告诉我详细的试验方法？我的菌是BL21，载体pET28a，蛋白32kd。
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1楼2009-02-26 13:17:18
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qrf0704

铁虫 (小有名气)
muchong5577(金币+1): 2010-01-28 17:26
我现在也在做重组蛋白的表达，也是包涵体，但是发现低温诱导可以改善其表达的情况，上清液中会有蛋白了，或者你用盐酸胍或者尿素来处理包涵体。
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5楼2010-01-28 13:00:03
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 2-26 18:29
这个不同的蛋白有不同的策略，LZ还是多看些文献吧。
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2楼2009-02-26 14:18:33
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catzp

银虫 (小有名气)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 2-26 18:30
先摸条件吧，一般的Pet表达都是防止包涵体的生成，也就是低温诱导，低速摇床，低IPTG。至于具体情况，需要在预试验摸
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3楼2009-02-26 15:30:38
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)
muchong5577(金币+1): 2010-01-28 17:27
可以试一下换一个带GST标签的表达载体。可溶性增大后在同等条件下成为包涵体的机会小一些。
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4楼2010-01-28 01:09:50
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