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muchong5577

金虫 (正式写手)

[交流] 金币求技术

大家好，你们做过包涵体的可溶性表达吗？能否告诉我详细的试验方法？我的菌是BL21，载体pET28a，蛋白32kd。
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1楼 2009-02-26 13:17:18
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 2-26 18:29
这个不同的蛋白有不同的策略，LZ还是多看些文献吧。
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2楼2009-02-26 14:18:33
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catzp

银虫 (小有名气)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 2-26 18:30
先摸条件吧，一般的Pet表达都是防止包涵体的生成，也就是低温诱导，低速摇床，低IPTG。至于具体情况，需要在预试验摸
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3楼2009-02-26 15:30:38
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)
muchong5577(金币+1): 2010-01-28 17:27
可以试一下换一个带GST标签的表达载体。可溶性增大后在同等条件下成为包涵体的机会小一些。
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4楼2010-01-28 01:09:50
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qrf0704

铁虫 (小有名气)
muchong5577(金币+1): 2010-01-28 17:26
我现在也在做重组蛋白的表达，也是包涵体，但是发现低温诱导可以改善其表达的情况，上清液中会有蛋白了，或者你用盐酸胍或者尿素来处理包涵体。
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5楼2010-01-28 13:00:03
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muchong5577

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by qrf0704 at 2010-01-28 13:00:03:
我现在也在做重组蛋白的表达，也是包涵体，但是发现低温诱导可以改善其表达的情况，上清液中会有蛋白了，或者你用盐酸胍或者尿素来处理包涵体。

那你用的是什么载体，是在什么菌里表达呢？
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6楼2010-01-28 17:26:38
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zhangjh069975

银虫 (初入文坛)
也可以离心，观察一下沉淀中的蛋白
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心若在，梦就在！
7楼2010-01-28 17:31:45
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towindflower

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by muchong5577 at 2009-02-26 13:17:18:
大家好，你们做过包涵体的可溶性表达吗？能否告诉我详细的试验方法？我的菌是BL21，载体pET28a，蛋白32kd。

都包涵体的还怎么可溶表达,只能说的摸索可溶表达的条件,可以降低诱导强度,温度,换roseta.....
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8楼2010-01-28 17:53:44
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
muchong5577(金币+1):你有什么好的复性方法吗？ 2010-01-28 21:37
没事还是别在可溶性表达上费功夫。IB表达后纯化，复性。一般情况下得率很高，也会有活性。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
9楼2010-01-28 18:04:59
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muchong5577

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2010-01-28 18:04:59:
没事还是别在可溶性表达上费功夫。IB表达后纯化，复性。一般情况下得率很高，也会有活性。

你有什么好的复性方法吗？
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10楼2010-01-28 21:37:59
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