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zhmy26

金虫 (正式写手)

[交流] 克隆两个基因,如何串联?

本人打算异源表达两个基因。当然使用一个载体。这两个基因同时克隆。连接的时候ATG。。。TAA???ATG。。。TAA。两个基因之间如何串联?不需要连接序列吧?
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zhmy26

金虫 (正式写手)

当然,就是为宿主菌添加一条原先并不存在的代谢途径。酶蛋白基因来自其它外源菌株。谢谢。
7楼2009-02-27 21:17:30
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫

★ ★ ★
sxdxrhyy(金币+3,VIP+0):谢谢参与生物板块讨论,欢迎常来! 3-1 10:06
楼主根据你提供的信息 可能是以下情况
你的体系是原核还是真核 原核体内可以一个启动子启动一串序列 上一次核糖体就会表达很多基因 如果你的序列物理地址连续 那就直接全切出来或P出来 前面加一个启动子然后异源表达 如果物理地址不连续 那就分别克隆连一起就行 没有特殊要求
如果是原来反向的基因 在体内不受同一启动子 你可以构建反向的两个启动子后接两个基因序列

真核体系我没有做过 我建议用分开的各自适合的启动子 两个基因之间要留启动子的区域和SD序列 每一个基因都要单独启动单独上核糖体

如果是表达蛋白那是最简单的情况 但是不建议直接连进表达载体 这样效果可能会不好 往往后面一个基因得不到有效诱导 两个量不匹配 不知楼主你异源表达的用途 我微生物的
Bemühen Sie !
2楼2009-02-25 18:08:26
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zhmy26

金虫 (正式写手)

非常感谢。我是相对一种梭菌进行改造。为期添加一条原先并不存在代谢途径。属于原核表达。能否在更清楚地指导一下。感谢中。
3楼2009-02-25 20:13:16
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zhmy26

金虫 (正式写手)

我是想对一种梭菌进行代谢工程改造,为其添加一条新的代谢途径。所以需要克隆表达两个酶基因。谢谢。
4楼2009-02-25 20:17:33
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