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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 克隆两个基因，如何串联？
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zhmy26

金虫 (正式写手)

[交流] 克隆两个基因，如何串联？

本人打算异源表达两个基因。当然使用一个载体。这两个基因同时克隆。连接的时候ATG。。。TAA？？？ATG。。。TAA。两个基因之间如何串联？不需要连接序列吧？
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1楼 2009-02-25 15:58:19
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
★ ★ ★
sxdxrhyy(金币+3,VIP+0):谢谢参与生物板块讨论，欢迎常来！ 3-1 10:06
楼主根据你提供的信息 可能是以下情况
你的体系是原核还是真核 原核体内可以一个启动子启动一串序列 上一次核糖体就会表达很多基因 如果你的序列物理地址连续 那就直接全切出来或P出来 前面加一个启动子然后异源表达 如果物理地址不连续 那就分别克隆连一起就行 没有特殊要求
如果是原来反向的基因 在体内不受同一启动子 你可以构建反向的两个启动子后接两个基因序列

真核体系我没有做过 我建议用分开的各自适合的启动子 两个基因之间要留启动子的区域和SD序列 每一个基因都要单独启动单独上核糖体

如果是表达蛋白那是最简单的情况 但是不建议直接连进表达载体 这样效果可能会不好 往往后面一个基因得不到有效诱导 两个量不匹配 不知楼主你异源表达的用途 我微生物的
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2楼2009-02-25 18:08:26
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zhmy26

金虫 (正式写手)
非常感谢。我是相对一种梭菌进行改造。为期添加一条原先并不存在代谢途径。属于原核表达。能否在更清楚地指导一下。感谢中。
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3楼2009-02-25 20:13:16
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zhmy26

金虫 (正式写手)
我是想对一种梭菌进行代谢工程改造，为其添加一条新的代谢途径。所以需要克隆表达两个酶基因。谢谢。
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4楼2009-02-25 20:17:33
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
那楼主你打算转进体内了？转进原来菌才好改造了？基因是别的菌来源 转进你的目标宿主是吗？
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5楼2009-02-27 19:36:43
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hepatitis

引用回帖:
Originally posted by chemifunan at 2009-2-25 18:08:
楼主根据你提供的信息 可能是以下情况
你的体系是原核还是真核 原核体内可以一个启动子启动一串序列 上一次核糖体就会表达很多基因 如果你的序列物理地址连续 那就直接全切出来或P出来 前面加一个启动子然后异源 ...

如果是研究一个功能基因的情况,最好是采用2个启动子,否则很可能影响其功能的发挥.
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6楼2009-02-27 20:17:00
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zhmy26

金虫 (正式写手)
当然，就是为宿主菌添加一条原先并不存在的代谢途径。酶蛋白基因来自其它外源菌株。谢谢。
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7楼2009-02-27 21:17:30
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
两个启动子和一个启动子都用一下 做个对照 注意一下方向 启动子区域和SD序列 是否成功要看具体体系 异源表达影响因素比较多 P基因的时候往前P一段 不要顶着起始密码子头上开始
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8楼2009-02-28 19:04:40
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zhmy26

金虫 (正式写手)
多谢指教。不胜感激。
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9楼2009-02-28 19:30:00
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
不敢 不客气 交流而已
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10楼2009-03-01 17:38:23
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