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feifei2012

金虫 (小有名气)


[交流] 绿脓杆菌,怎么操作,才能保证重复实验中细菌生长或活性基本一致?

各位大侠,
本人微生物小白,请问做细菌(绿脓杆菌)生长实验中。怎么样操作,才能保证重复实验中细菌生长或活性基本一致?

情况说明:

三次不同日期的重复实验:

从平板培养基上取单菌落,接种环在10ml TSB培养液中充分搅拌后,240rpm、37度过夜培养。每次相同的时间后,测得的OD值(e.g. 1.25, 0.90)不尽相同,而且有时候肉眼看,细菌就没有长起来 。

那么,OD值(e.g. 1.25, 0.90)不同的菌悬液经过稀释得到同样OD值(e.g. 0.01)的稀释后菌液。这个稀释后的菌液拿去做细菌生长实验,是不是生长曲线或活性不一样?是不是有的长得快,有的长得慢?

看到有的人是这样做的:

先培养一定OD值的菌悬液,然后放4度冷藏,需要时再将菌液稀释使用。这样可行吗?冷藏大概能用多久?

需要指数期的细菌,怎么控制,把握呢。谢谢!
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狗狗狗尾巴草

金虫 (小有名气)


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feifei2012(金币+1): 谢谢参与
snoopytbw: 金币+3, 鼓励 2017-11-25 07:16:13
不同OD值稀释得到的OD0.01的菌体生长状况不能保证是一样的。OD值检测的只是培养基的浑浊度,不能区分死菌和活菌。细菌生长时间越长,死菌越多,OD1.2的话,至少培养24小时。建议用OD值小于1的菌液稀释。理论上绿脓在4°不生长,至于能放多久就不知道了。

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3楼2017-11-24 14:19:36
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南风778

新虫 (初入文坛)



feifei2012(金币+1): 谢谢参与
你们实验室也做铜绿吗?  测生长曲线可以用96酶标仪

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16楼2017-11-24 23:59:42
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南风778

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
16楼: Originally posted by 南风778 at 2017-11-24 23:59:42
你们实验室也做铜绿吗?  测生长曲线可以用96酶标仪

用96孔板上酶标仪测。我们实验室这样测:过夜摇菌,第二天早上测od值,把od调到一致,在摇床摇 每隔二小时拿96孔板去酶标仪扫一下,把od和发光都测了

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17楼2017-11-25 00:02:50
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feifei2012

金虫 (小有名气)


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引用回帖:
3楼: Originally posted by 狗狗狗尾巴草 at 2017-11-24 14:19:36
不同OD值稀释得到的OD0.01的菌体生长状况不能保证是一样的。OD值检测的只是培养基的浑浊度,不能区分死菌和活菌。细菌生长时间越长,死菌越多,OD1.2的话,至少培养24小时。建议用OD值小于1的菌液稀释。理论上绿脓在 ...

谢谢!那我就先培养到一定浓度再冷藏起来吧

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18楼2017-11-26 13:27:24
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feifei2012

金虫 (小有名气)


送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by 南风778 at 2017-11-24 23:59:42
你们实验室也做铜绿吗?  测生长曲线可以用96酶标仪

嗯 主要是用绿脓杆菌来进行试验~

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19楼2017-11-26 13:28:20
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糖豆1990

新虫 (初入文坛)



feifei2012(金币+1): 谢谢参与
我也在做这个菌

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23楼2017-11-27 10:24:26
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feifei2012

金虫 (小有名气)


引用回帖:
23楼: Originally posted by 糖豆1990 at 2017-11-27 10:24:26
我也在做这个菌

从平板上接种到液体培养基,现在不长了有人知道怎么复苏活化吗
28楼2017-11-28 11:06:10
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hydzp2楼
2017-11-24 13:52   回复  
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