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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 绿脓杆菌，怎么操作，才能保证重复实验中细菌生长或活性基本一致？
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feifei2012

金虫 (小有名气)

[交流] 绿脓杆菌，怎么操作，才能保证重复实验中细菌生长或活性基本一致？

各位大侠，
本人微生物小白，请问做细菌（绿脓杆菌）生长实验中。怎么样操作，才能保证重复实验中细菌生长或活性基本一致？

情况说明：

三次不同日期的重复实验：

从平板培养基上取单菌落，接种环在10ml TSB培养液中充分搅拌后，240rpm、37度过夜培养。每次相同的时间后，测得的OD值（e.g. 1.25, 0.90）不尽相同，而且有时候肉眼看，细菌就没有长起来 。

那么，OD值（e.g. 1.25, 0.90）不同的菌悬液经过稀释得到同样OD值（e.g. 0.01）的稀释后菌液。这个稀释后的菌液拿去做细菌生长实验，是不是生长曲线或活性不一样？是不是有的长得快，有的长得慢？

看到有的人是这样做的：

先培养一定OD值的菌悬液，然后放4度冷藏，需要时再将菌液稀释使用。这样可行吗？冷藏大概能用多久？

需要指数期的细菌，怎么控制，把握呢。谢谢！
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1楼 2017-11-24 13:24:42
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狗狗狗尾巴草

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
feifei2012(金币+1): 谢谢参与
snoopytbw: 金币+3, 鼓励 2017-11-25 07:16:13
不同OD值稀释得到的OD0.01的菌体生长状况不能保证是一样的。OD值检测的只是培养基的浑浊度，不能区分死菌和活菌。细菌生长时间越长，死菌越多，OD1.2的话，至少培养24小时。建议用OD值小于1的菌液稀释。理论上绿脓在4°不生长，至于能放多久就不知道了。
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feifei2012
3楼2017-11-24 14:19:36
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南风778

新虫 (初入文坛)
★
feifei2012(金币+1): 谢谢参与
你们实验室也做铜绿吗？  测生长曲线可以用96酶标仪

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feifei2012
16楼2017-11-24 23:59:42
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南风778

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 南风778 at 2017-11-24 23:59:42
你们实验室也做铜绿吗？  测生长曲线可以用96酶标仪

用96孔板上酶标仪测。我们实验室这样测：过夜摇菌，第二天早上测od值，把od调到一致，在摇床摇 每隔二小时拿96孔板去酶标仪扫一下，把od和发光都测了

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17楼2017-11-25 00:02:50
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feifei2012

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 狗狗狗尾巴草 at 2017-11-24 14:19:36
不同OD值稀释得到的OD0.01的菌体生长状况不能保证是一样的。OD值检测的只是培养基的浑浊度，不能区分死菌和活菌。细菌生长时间越长，死菌越多，OD1.2的话，至少培养24小时。建议用OD值小于1的菌液稀释。理论上绿脓在 ...

谢谢！那我就先培养到一定浓度再冷藏起来吧

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18楼2017-11-26 13:27:24
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feifei2012

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by 南风778 at 2017-11-24 23:59:42
你们实验室也做铜绿吗？  测生长曲线可以用96酶标仪

嗯 主要是用绿脓杆菌来进行试验～

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19楼2017-11-26 13:28:20
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糖豆1990

新虫 (初入文坛)
★
feifei2012(金币+1): 谢谢参与
我也在做这个菌

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23楼2017-11-27 10:24:26
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feifei2012

金虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 糖豆1990 at 2017-11-27 10:24:26
我也在做这个菌

从平板上接种到液体培养基，现在不长了有人知道怎么复苏活化吗
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28楼2017-11-28 11:06:10
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hydzp2楼
2017-11-24 13:52   回复  
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tzynew4楼
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youngen6楼
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hongyingwu9楼
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