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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » sds-page电泳问题急求！！！
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juaner-1983

银虫 (小有名气)

[交流] sds-page电泳问题急求！！！

各位高手们，
我是蛋白电泳的初学者，
最近做了一个多月的sds-page了
不知道是什么原因，样品老是飞起来
都快哭了，呜呜呜~~~~
谁能帮我分析一下啊，万分感谢啊

[ Last edited by amisking on 2009-8-1 at 15:51 ]
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1楼 2009-02-24 21:03:28
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yanlili

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
菌液在加了loading buffer之后裂解，会有很多比较黏的物质，我加菌液的时候也经常这样。后来发现，在-20冰一天再用就好多了，你可以试试哦
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22楼2009-06-30 20:54:50
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查看全部 35 个回答

chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
★ ★ ★
lwf991229(金币+1,VIP+0):辛苦~ 2-24 22:13
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-30 17:54
juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:18
请楼主介绍详细一些你的问题 请问飞起来是什么意思
SDSPAGE是生化基本操作 大致如下：
根据蛋白大小选胶 越大越无所谓 越小胶越浓 比如40K 那就用个10%的 120k 比较随意 10kD 那就15的
然后把蛋白和SDS/溴酚兰（5*）一起煮 沸水浴8分钟 12000rpm离心
倒胶 把Buffer 30PAGE 水混合 加AP 再加TMEDA 混匀 按这个顺序 水封 等半小时
然后堆积胶 再凝了 上样 上样前离心样品
纯化的上多些 全菌要少上 否则会弥散
然后是电压 堆积前60V 堆积到一条线 升到100V 就好了
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Bemühen Sie !
2楼2009-02-24 21:58:22
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
★
juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:18
需要注意的问题比较多 请楼主把问题介绍详细些
赞一下(2人) 回复此楼
Bemühen Sie !
3楼2009-02-24 21:59:18
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pxmyz

银虫 (小有名气)
★
juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:19
是不是配置的上样缓冲液有问题，要不上样的时候怎么会飘样呢？
赞一下(2人) 回复此楼
Ican，Ido.
4楼2009-02-24 23:34:53
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