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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » sds-page电泳问题急求！！！
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juaner-1983

银虫 (小有名气)

[交流] sds-page电泳问题急求！！！

各位高手们，
我是蛋白电泳的初学者，
最近做了一个多月的sds-page了
不知道是什么原因，样品老是飞起来
都快哭了，呜呜呜~~~~
谁能帮我分析一下啊，万分感谢啊

[ Last edited by amisking on 2009-8-1 at 15:51 ]
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1楼 2009-02-24 21:03:28
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
★ ★ ★
lwf991229(金币+1,VIP+0):辛苦~ 2-24 22:13
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-30 17:54
juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:18
请楼主介绍详细一些你的问题 请问飞起来是什么意思
SDSPAGE是生化基本操作 大致如下：
根据蛋白大小选胶 越大越无所谓 越小胶越浓 比如40K 那就用个10%的 120k 比较随意 10kD 那就15的
然后把蛋白和SDS/溴酚兰（5*）一起煮 沸水浴8分钟 12000rpm离心
倒胶 把Buffer 30PAGE 水混合 加AP 再加TMEDA 混匀 按这个顺序 水封 等半小时
然后堆积胶 再凝了 上样 上样前离心样品
纯化的上多些 全菌要少上 否则会弥散
然后是电压 堆积前60V 堆积到一条线 升到100V 就好了
赞一下(18人) 回复此楼
Bemühen Sie !
2楼2009-02-24 21:58:22
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
★
juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:18
需要注意的问题比较多 请楼主把问题介绍详细些
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Bemühen Sie !
3楼2009-02-24 21:59:18
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pxmyz

银虫 (小有名气)
★
juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:19
是不是配置的上样缓冲液有问题，要不上样的时候怎么会飘样呢？
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Ican，Ido.
4楼2009-02-24 23:34:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:19
没加loading buffer吗……………………………………
还是说上样的时候太鸡冻了……冲起来了
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5楼2009-02-25 00:05:25
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小神300

新虫 (初入文坛)
★
juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:19
你准备跑电泳的样品，除了蛋白，还有其他成分吗，实验室里有碰到过若样品中有盐酸胍，即使加了loading buffer处理，沉降效果不好
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6楼2009-02-25 00:29:18
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★ ★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-30 17:55
juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:19
loading buffer 的问题，看好是多少fold的，还有一种可能就是你的蛋白有肯能纯度或者浓度不够。
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会当凌绝顶，一览众山小
7楼2009-02-25 02:20:22
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:19
是什么时候飞起来？电泳时？那么可能是电极接反了，也有可能是缓冲液PH不对。点样时飞的话就看loading buffer了。
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金币是赌出来的
8楼2009-02-25 09:24:32
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caas06a131

铜虫 (小有名气)
★
juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:19
1.人品问题，手发抖
2.样品没处理好，上样缓冲液不好
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9楼2009-02-25 15:53:10
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juaner-1983

银虫 (小有名气)
我做的是全菌的
对数期的菌液1ml，离心，弃上清，取沉淀，
加2*loading buffer 50ml
混匀，沸水浴5min
之后点样就出现了上述问题，飞的不得了
我快疯了，各位高手，能给指点一下迷津吗？？
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10楼2009-02-25 20:56:11
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