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juaner-1983银虫 (小有名气)
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[交流]
sds-page电泳问题急求！！！
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各位高手们， 我是蛋白电泳的初学者， 最近做了一个多月的sds-page了 不知道是什么原因，样品老是飞起来 都快哭了，呜呜呜~~~~ 谁能帮我分析一下啊，万分感谢啊 [ Last edited by amisking on 2009-8-1 at 15:51 ] |
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juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:18
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请楼主介绍详细一些你的问题 请问飞起来是什么意思 SDSPAGE是生化基本操作 大致如下： 根据蛋白大小选胶 越大越无所谓 越小胶越浓 比如40K 那就用个10%的 120k 比较随意 10kD 那就15的 然后把蛋白和SDS/溴酚兰（5*）一起煮 沸水浴8分钟 12000rpm离心 倒胶 把Buffer 30PAGE 水混合 加AP 再加TMEDA 混匀 按这个顺序 水封 等半小时 然后堆积胶 再凝了 上样 上样前离心样品 纯化的上多些 全菌要少上 否则会弥散 然后是电压 堆积前60V 堆积到一条线 升到100V 就好了 |
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