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juaner-1983

银虫 (小有名气)

[交流] sds-page电泳问题急求!!!

各位高手们,
我是蛋白电泳的初学者,
最近做了一个多月的sds-page了
不知道是什么原因,样品老是飞起来
都快哭了,呜呜呜~~~~
谁能帮我分析一下啊,万分感谢啊

[ Last edited by amisking on 2009-8-1 at 15:51 ]
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫


juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:18
需要注意的问题比较多 请楼主把问题介绍详细些
Bemühen Sie !
3楼2009-02-24 21:59:18
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫

★ ★ ★
lwf991229(金币+1,VIP+0):辛苦~ 2-24 22:13
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-30 17:54
juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:18
请楼主介绍详细一些你的问题 请问飞起来是什么意思
SDSPAGE是生化基本操作 大致如下:
根据蛋白大小选胶 越大越无所谓 越小胶越浓 比如40K 那就用个10%的 120k 比较随意 10kD 那就15的
然后把蛋白和SDS/溴酚兰(5*)一起煮 沸水浴8分钟 12000rpm离心
倒胶 把Buffer 30PAGE 水混合 加AP 再加TMEDA 混匀 按这个顺序 水封 等半小时
然后堆积胶 再凝了 上样 上样前离心样品
纯化的上多些 全菌要少上 否则会弥散
然后是电压 堆积前60V 堆积到一条线 升到100V 就好了
Bemühen Sie !
2楼2009-02-24 21:58:22
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pxmyz

银虫 (小有名气)


juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:19
是不是配置的上样缓冲液有问题,要不上样的时候怎么会飘样呢?
Ican,Ido.
4楼2009-02-24 23:34:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


juaner-1983(金币+1,VIP+0): 7-31 09:19
没加loading buffer吗……………………………………
还是说上样的时候太鸡冻了……冲起来了
5楼2009-02-25 00:05:25
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