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monet1234

禁虫 (初入文坛)
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1楼2017-11-17 11:08:18
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ksws0465326

金虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by monet1234 at 2017-11-17 12:52:19
his标签蛋白呢？多少KDa？我的目的蛋白在原有的基础上只增加了不超过10kDa
...

his标签在ORF1前，不过有两个，140-157和270-287, 不过你的目的蛋白应该是插入在多克隆位点里，这个表达的方向与ORF1蛋白正好相反，不应该考虑ORF1的蛋白大小，应该就是你目的蛋白的大小大概10kDa左右。两个标签看你用哪个了，一个在上游一个在下游
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5楼2017-11-17 15:10:06
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ksws0465326

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by monet1234 at 2017-11-17 16:10:12
我是用的BamH l和Hind lll这两个酶切的载体
...

那你表达蛋白就是目的蛋白的大小，His标签的大小基本可以忽略不计，但是要注意，如果你想要使用上游的标签，在插入目的基因时要在Hind III序列前加入目的基因终止序列，如果要使用下游标签，要去掉目的基因终止序列
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8楼2017-11-17 16:18:16
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monet1234

禁虫 (初入文坛)
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2楼2017-11-17 11:19:39
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一共三段ORF, ORF1:523-1023, 167aa, 17-18KDa, ORF2:896-1855, 320aa, 34-35KDa, ORF3: 3995-4810, 272aa, 30-31KDa
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3楼2017-11-17 12:11:13
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monet1234

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4楼2017-11-17 12:52:19
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monet1234

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6楼2017-11-17 16:10:12
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monet1234

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7楼2017-11-17 16:11:01
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monet1234

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9楼2017-11-17 19:54:56
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monet1234

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10楼2017-11-17 19:55:55
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