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研一小白求助qpcr引物设计 已有3人参与
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刚上研一做qpcr，用的是SYBR GRERN，绝对定量，设计了几对引物，不是特异性不好，就是有引物二聚体，还得重新设计引物，求大神指导！ 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2017-11-16 19:40:09
3楼2017-11-19 15:15:58
4楼2017-11-29 19:31:50
soarrow
铁杆木虫 (正式写手)
酱油歪楼党
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(1) 首先要看看你扩增的是什么靶基因---细胞？细菌？病毒？这个会涉及需要花多少时间，下多少功夫对基因进行比对分析来寻找靶基因的保守区---用于引物设计。 (2) 具体的引物设计，有很多软件都可以使用，例如我以前用得最顺手的是ABI的Primer Express 3.0，是ABI realtime PCR仪自带的，小木虫这里也能找到。相当的简单易用，而且效果不错，，，以前折腾过几十套引物扩各种东东，绝大部分都好使。 当然，也可以用Primer Premier, Vector NTI, Oligo, 以及NCBI的 primer blast，，， 设计完了以后，引物最好再用BLAST过一遍。 (3) 另外还有就是引物最好多设计两套，然后相同实验条件去筛选，这样能够提高效率...  |
5楼2017-12-06 05:02:41
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之前我用的primer premier 5 后来改用IDT的网页设计了 http://sg.idtdna.com/scitools/Applications/RealTimePCR/ 这个网站非常好用 希望对你有帮助 |
6楼2017-12-06 11:09:59