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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 烟草亚细胞定位载体构建及表达
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遗丶失

铜虫 (小有名气)

[求助] 烟草亚细胞定位载体构建及表达 已有2人参与

本人最近在做亚细胞定位实验，用的是本氏烟，载体构建（35S-目的片段-mGFP5-ER），目的片段768bp（已去除终止密码子），目的片段去除末端与GFP之间的linker为21碱基不含终止密码子，但连着两次注射烟草均是GFP空载正常表达荧光而融合了目的片段的均未表达，求大神指点

烟草亚细胞定位载体构建及表达
目的片段1.jpg


烟草亚细胞定位载体构建及表达-1
目的片段2.jpg


烟草亚细胞定位载体构建及表达-2
GFP空载.jpg
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1楼 2017-11-16 14:30:28
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遗丶失

铜虫 (小有名气)
目的片段末端与GFP之间的linker为21碱基不含终止密码子
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2楼2017-11-16 14:31:33
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丑橘不知火

新虫 (初入文坛)
同问

发自小木虫IOS客户端
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3楼2017-11-16 23:59:41
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匿名

用户注销 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
遗丶失: 金币+5, ★有帮助 2018-03-15 20:51:21
本帖仅楼主可见
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4楼2017-12-07 18:52:07
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

karen_zm

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
drwhoknowss: 金币+2, 鼓励交流 2018-02-02 04:25:42
遗丶失: 金币+5, ★有帮助 2018-03-15 20:51:35
最简单的办法是重新构建一下载体试试，有时候挑的克隆可能会有问题。再就是GFP的融合方向会影响蛋白表达，特别是有些蛋白的N端有信号肽的，就不能将GFP融合在蛋白的N端，所以你也可以试试把GFP融合在C端。
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5楼2018-02-01 17:18:42
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龙小笈

新虫 (小有名气)
你在荧光共聚焦显微镜下看看，我做的在荧光下直接看，也是看不到，但是在显微镜下可以

发自小木虫Android客户端
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6楼2018-04-05 23:10:35
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