| 查看: 759 | 回复: 0 | |||
[交流]
psiCHECK2构建载体遇到问题
|
|
双酶切： 用的Not1和Xho1酶。载体双酶切的时候，载体长度6000+bp，双酶切，结果跑胶，有一条带（两个酶切位点之间只有30+bp,切下去了跑胶会看到吗？）。但是全部胶回收的时候有时候会有两条带，都很亮，500+bp和大于2000bp的，是质粒的不同形态吗？是不是说明我没切开？如果切开应该是什么情况？是不是要全部是线型的，然后长度就是6000+bp才对? 有几次感觉目的片段双酶切后胶回收大小也不对，本来315bp，胶回收的时候感觉在500bp左右，也不知道是怎么回事。高保真酶PCR产物和连在T载体上的都来酶切过。 连接： 我还是切了最长的那端胶回收，但是胶回收浓度都很低，10ng/ul左右，PCR产物胶回收后更低。看有的帖子说胶回收后浓度就是很低，测不出来，要看条带亮度来决定最后的体积比，但是又有人说连接比例是要看摩尔比，所以我搞不懂了。而且胶回收浓度那么低，跑胶跑的出来吗？ 做了好久了，一直弄不好，还是想问每一步的结果都要怎么检测？怎样才是正确的？不然这样迷迷糊糊做到转化涂板，菌液PCR也是没结果。 求助 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有198人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
5