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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 毕赤酵母表达
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达 已有1人参与

各位战友，我用毕赤酵母GS115表达72KD左右的蛋白，用了组成型表达和诱导型表达，rt水平很高，但蛋白检测不到。因为用的分泌肽，但上清中没有蛋白，破了胞，胞内也没有任何我要的蛋白。所以是我的蛋白翻译出现了问题，还是折叠过程除了问题，都被降解干净了？还是有别的原因？望各位帮忙分析分析！急着毕业！

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1楼 2017-11-10 08:59:21
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菜头Q

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你怎么检测的RT水平啊？转化子经过高表达筛选了吗？感觉说的有点少。
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2楼2017-11-28 15:16:39
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 菜头Q at 2017-11-28 15:16:39
你怎么检测的RT水平啊？转化子经过高表达筛选了吗？感觉说的有点少。

rt 的话用的是设计基因内部的RT 引物，发现相对于内参基因ACT ，我的蛋白基因转录水平要高出十几倍，但是就是检测不到蛋白。
没有做多拷贝的筛选，这个很重要吗？

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3楼2017-11-29 15:30:21
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小野说

新虫 (初入文坛)
72KD的分子对于毕赤酵母来说大吗？
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4楼2018-02-27 15:58:25
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江灵敏

新虫 (小有名气)
我得是50KD，同样也没有，讨论讨论

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5楼2018-04-17 22:53:52
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江子龙涛TT

新虫 (初入文坛)
你好 你现在表达了吗？

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6楼2018-09-13 13:25:27
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江子龙涛TT

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 三鱼舟 at 2017-11-10 08:59:21
各位战友，我用毕赤酵母GS115表达72KD左右的蛋白，用了组成型表达和诱导型表达，rt水平很高，但蛋白检测不到。因为用的分泌肽，但上清中没有蛋白，破了胞，胞内也没有任何我要的蛋白。所以是我的蛋白翻译出现了问题 ...

可以加个好友交流一下吗？

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7楼2018-09-13 13:33:00
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孤鸿豪豪

新虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 江子龙涛TT at 2018-09-13 13:33:00
可以加个好友交流一下吗？
...

我做酵母2年了，咱们可以交流一下

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8楼2018-09-14 15:26:20
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