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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达 已有1人参与

各位战友,我用毕赤酵母GS115表达72KD左右的蛋白,用了组成型表达和诱导型表达,rt水平很高,但蛋白检测不到。因为用的分泌肽,但上清中没有蛋白,破了胞,胞内也没有任何我要的蛋白。所以是我的蛋白翻译出现了问题,还是折叠过程除了问题,都被降解干净了?还是有别的原因?望各位帮忙分析分析!急着毕业!

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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 菜头Q at 2017-11-28 15:16:39
你怎么检测的RT水平啊?转化子经过高表达筛选了吗?感觉说的有点少。

rt 的话用的是设计基因内部的RT 引物,发现相对于内参基因ACT ,我的蛋白基因转录水平要高出十几倍,但是就是检测不到蛋白。
没有做多拷贝的筛选,这个很重要吗?

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3楼2017-11-29 15:30:21
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菜头Q

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你怎么检测的RT水平啊?转化子经过高表达筛选了吗?感觉说的有点少。
2楼2017-11-28 15:16:39
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小野说

新虫 (初入文坛)

72KD的分子对于毕赤酵母来说大吗?
4楼2018-02-27 15:58:25
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江灵敏

新虫 (小有名气)

我得是50KD,同样也没有,讨论讨论

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5楼2018-04-17 22:53:52
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